磷酸激酶PKC參與酒精調(diào)節(jié)GABAA受體的機制研究.pdf

1、目的:探索磷酸激酶C(PKC)在酒精撤退引起的小鼠海馬神經(jīng)元γ-氨基丁酸A型(GABAA)受體對酒精敏感性下降的作用機制，并探討其對GABAA受體亞基轉(zhuǎn)運的可能調(diào)控方式。
　　方法:在體外原代培養(yǎng)14-15天(DIV14-15)的小鼠海馬神經(jīng)元中建立單次酒精暴露\撤退的細胞模型，采用全細胞膜片鉗技術(shù)檢測酒精撤退1或24小時后海馬神經(jīng)元GABAA受體介導(dǎo)的微小抑制性突觸后電流(mIPSCs)和緊張性抑制電流（Itonic）的變化情況

2、，由此判斷突觸后和突觸外GABAA受體功能的變化情況。再分別給予PKC抑制劑(chelerythrine)或激活劑(PDBu)干預(yù)神經(jīng)元，檢測單次酒精暴露\撤退引起的GABAA受體功能變化與PKC的關(guān)系。此外，利用表面生物素化標記和Western blot技術(shù)檢測PKC激活與抑制在單次酒精暴露\撤退1小時后，對GABAA受體α4亞基的內(nèi)化情況的調(diào)節(jié)作用，并在單次酒精暴露\撤退15分鐘后檢測不同腦區(qū)GABAA受體亞基α4、pβ3和δ內(nèi)化情

3、況。
　　結(jié)果:1）酒精暴露/撤退后1小時急性酒精作用，I tonic增強率明顯抑制，酒精暴露/撤退后24小時后急性酒精作用，mIPSCs增強而Itonic增強率明顯抑制，PKC抑制劑chelerythrine可以減弱酒精的mIPSCs和Itonic調(diào)節(jié)作用，激動劑PDBu則增強酒精的作用;2）酒精暴露/撤退可以引起GABAA受體α4亞基內(nèi)化的增加，PKC抑制劑chelerythrine可以抑制α4亞基內(nèi)化;3）酒精暴露/撤退15