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文檔簡介
1、中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)博士學(xué)位論文沙門氏菌多聚磷酸激酶介導(dǎo)cAMPCRP調(diào)控rpoS及氧化壓力應(yīng)答姓名:程園園申請學(xué)位級別:博士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:孫寶林20090501摘要改變是由于侈舔?qū)讐旱恼{(diào)控導(dǎo)致的。鑒于細(xì)胞內(nèi)還有另一種過氧化氫酶編碼基因,婦酊。我們監(jiān)測了勉酊表達(dá),在排除了婦酊表達(dá)變化的情況下,可以推斷,礎(chǔ)負(fù)調(diào)控p舔的表達(dá),最終導(dǎo)致抗氧化能力的改變。進(jìn)一步的研究著力于發(fā)現(xiàn)礎(chǔ)是通過何種途徑影響印舔的轉(zhuǎn)錄,其中涉及哪些中間
2、因子。在我們觀測的若干個因子中發(fā)現(xiàn),礎(chǔ)敲除后印的表達(dá)上升,因此可能影響到細(xì)胞內(nèi)重要的信號系統(tǒng)c伽CI沖復(fù)合物的濃度。為了驗(yàn)證礎(chǔ)敲除后,細(xì)胞內(nèi)的c創(chuàng)帥CRP復(fù)合物濃度的變化是否與印的表達(dá)變化一致。我們敲除印以基因,它編碼胞內(nèi)主要負(fù)責(zé)降解c舢皿的酶。比較c伽舊CRP下游基因在野生型、艘七缺失株和印刎缺失株中表達(dá),證實(shí)礎(chǔ)敲除導(dǎo)致胞內(nèi)cAMPCI沖濃度的升高。生物信息學(xué)預(yù)測在p嘏的啟動子區(qū)域有兩個可能的c√6山但CRP結(jié)合位點(diǎn),但是一直未有直接
3、的實(shí)驗(yàn)證據(jù)證明這一點(diǎn)。我們通過凝膠電泳阻滯實(shí)驗(yàn)證明在印心的啟動子上的確有兩個CRP結(jié)合位點(diǎn),并通過定點(diǎn)突變保守的CI沖結(jié)合堿基進(jìn)一步確定了兩種的結(jié)合作用。然后,我們通過構(gòu)建半乳糖苷酶報(bào)告質(zhì)粒觀測堿基突變后,印舔啟動子的活性變化,證明c伽CRP是印心的轉(zhuǎn)錄激活子。因此,我們的研究顯示了印七可通過c√心口CRP負(fù)調(diào)控仞舔的表達(dá),并且首次證明cAMPCRP可直接結(jié)合于印DS的啟動子并激活其表達(dá)。關(guān)鍵詞:多聚磷酸激酶、鼠傷寒沙門氏菌、印S、c舢
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