化療藥物對(duì)小鼠T細(xì)胞歸巢至二級(jí)淋巴器官的影響及機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:
　　化療是治療腫瘤的主要方法之一，但是由于化療藥物自身的缺陷和對(duì)機(jī)體無(wú)選擇性的殺傷，導(dǎo)致化療藥物不能徹底的清除腫瘤細(xì)胞。有研究顯示，化療的腫瘤患者普遍免疫力低下，有近半數(shù)的腫瘤患者在癌癥侵襲或者器官衰竭前就死于感染。
　　眾所周知，抗瘤免疫的主要細(xì)胞是腫瘤抗原特異性T細(xì)胞。T細(xì)胞不僅作為腫瘤抗原特異性的T細(xì)胞，發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞的效應(yīng)，而且還在機(jī)體對(duì)抗感染中也起到重要作用。T細(xì)胞要發(fā)揮作用，必須先被趨化到二級(jí)淋巴器官中

2、的T細(xì)胞區(qū)，與同樣被趨化的抗原遞呈細(xì)胞相互作用，活化、增殖，進(jìn)而進(jìn)入外周器官發(fā)揮殺傷腫瘤或者抗感染效應(yīng)。T細(xì)胞被趨化因子趨化進(jìn)入二級(jí)淋巴器官的T細(xì)胞區(qū)這個(gè)過(guò)程也叫做歸巢。因此T細(xì)胞歸巢的質(zhì)和量決定著機(jī)體免疫效應(yīng)的質(zhì)量，趨化足夠量的T細(xì)胞歸巢到二級(jí)淋巴器官是機(jī)體發(fā)揮免疫效應(yīng)的基礎(chǔ)。T細(xì)胞主要受到二級(jí)淋巴器官中g(shù)p38+CD31-的基質(zhì)細(xì)胞——成纖維網(wǎng)狀細(xì)胞(FRCs)分泌的趨化因子CCL21、CCL19的趨化，通常是CCL21在T細(xì)胞的歸

3、巢中發(fā)揮著主要作用。以往有研究表明，減少淋巴組織中趨化因子的平衡穩(wěn)定的表達(dá)，會(huì)減少T細(xì)胞和DCs在T細(xì)胞區(qū)的相遇，從而削弱免疫反應(yīng)強(qiáng)度。
　　因此，我們課題組想研究化療藥物對(duì)二級(jí)淋巴器官有什么影響？對(duì)T細(xì)胞歸巢有什么樣的改變？在預(yù)實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，化療后小鼠脾臟T細(xì)胞被趨化到脾臟的數(shù)量減少，而這個(gè)現(xiàn)象的原因是脾臟基質(zhì)細(xì)胞分泌的趨化因子的減少。為了更深入的研究T細(xì)胞及二級(jí)淋巴的基質(zhì)細(xì)胞在化療中受到的影響，我們選擇了臨床上治療肺癌常用的

4、順鉑、吉西他濱、5-FU三種化療藥物，通過(guò)建立小鼠化療模型，研究化療對(duì)二級(jí)淋巴器官的基質(zhì)細(xì)胞及T細(xì)胞歸巢的影響，闡明這三種藥物對(duì)二級(jí)淋巴器官及免疫細(xì)胞的影響及可能的機(jī)制。
　　方法:
　　1.建立小鼠化療模型，通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)、免疫熒光等技術(shù)觀察小鼠T細(xì)胞在二級(jí)淋巴器官的歸巢情況。
　　2.通過(guò)免疫熒光、酶聯(lián)吸附試驗(yàn)(Elisa)檢測(cè)、RT-PCR等檢測(cè)小鼠二級(jí)淋巴器官中趨化因子CCL21、CCL19的表達(dá)。
　

5、　3.結(jié)合小鼠脾臟基質(zhì)細(xì)胞體外分離培養(yǎng)，通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)、免疫熒光技術(shù)檢測(cè)其凋亡情況，明確化療藥物對(duì)脾臟基質(zhì)細(xì)胞凋亡的作用。
　　結(jié)果:
　　1.化療藥物順鉑、吉西他濱、5-FU治療后，小鼠脾臟基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的CCL21明顯降低，歸巢的T細(xì)胞明顯減少。
　　2.化療藥物順鉑、吉西他濱、5-FU治療后，小鼠淋巴結(jié)趨化的T細(xì)胞與對(duì)照組無(wú)明顯差異。其分泌的趨化因子CCL21、CCL19無(wú)明顯差異。
　　3.化療藥物順鉑、