組織蛋白酶S(CTSS)對人肝癌細(xì)胞株MHCC97H藥物敏感性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:組織蛋白酶S(CTSS)已經(jīng)被報道可以增加眾多惡性腫瘤的表達(dá)及腫瘤活性。然而沉默CTSS誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞MHCC97H凋亡的作用機(jī)制目前尚不清楚。
　　方法:采用已獲得的肝癌細(xì)胞系作為基礎(chǔ)的研究實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)來評價CTSS在人肝癌細(xì)胞中的作用和相關(guān)機(jī)制，利用熒光定量PCR和Western blot篩選高表達(dá)CTSS的肝癌細(xì)胞系;利用慢病毒干擾CTSS及其受體蛋白酶激活受體-2（PAR2）的表達(dá)，并通過流式細(xì)胞儀檢測其凋亡，利用West

2、ern blot檢測其NF-κB通路的變化;利用蜂毒素和多柔比星藥物干預(yù)進(jìn)行對比研究觀察，利用流式細(xì)胞儀及Western blot分別評價沉默CTSS后對藥物敏感性變化的情況，并檢測Caspase3蛋白的激活情況;最后利用裸鼠皮下移植瘤模型評估沉默CTSS后，肝癌細(xì)胞在體內(nèi)的生長及對蜂毒素敏感性的分析，利用ELISA法檢測Caspase3活性。
　　結(jié)果:在13株肝癌細(xì)胞系中，CTSS在MHCC97-H中表達(dá)最高。利用慢病毒介導(dǎo)的

3、小分子干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染沉默CTSS基因表達(dá)的PLVT1150中，CTSS基因及PAR2的mRNA和蛋白質(zhì)含量相應(yīng)地顯著性減少;相反，過表達(dá)CTSS基因的PSB880中， CTSS基因及PAR2的mRNA和蛋白質(zhì)含量相應(yīng)地顯著性增加。從而可以推測PAR2及CTSS基因之間存在正相關(guān)的關(guān)系。沉默CTSS基因的MHCC97-H細(xì)胞中，NF-κB信號通路的活性被抑制，可以觀察到更多的MHCC97-H細(xì)胞的凋亡(30.07％±1.8vs.18.58％

4、±1.6);但沉默CTSS過表達(dá)PAR2可使其凋亡率下降(30.07％±1.8vs.19.72％±1.5)。在MHCC97-H細(xì)胞中分別使用兩種可引起細(xì)胞凋亡藥物，蜂毒素（0，4和8μg/mL）處理30min，多柔比星（0和5μg/mL）處理24h，觀察兩種藥物對shCTSS和對照組細(xì)胞凋亡率。與對照組相比，PLVT1150細(xì)胞對蜂毒素（18.87％±2.1vs.4.27％±1.9，36.72％±2.2vs.15.32％±1.7，52.

5、98％±1.5vs.28.86％±2.2）和多柔比星（19.13％±2.0vs.3.84％±1.4，71.83％±2.5vs.32.66％±1.2）更敏感。沉默CTSS后，活化的Caspase-3顯著增加，表明CTSS與MHCC97-H細(xì)胞凋亡相關(guān)聯(lián)。在裸鼠體內(nèi)研究中，蜂毒素協(xié)同CTSS沉默可以顯著抑制肝癌的生長，并對蜂毒素引起的凋亡更加敏感。
　　結(jié)論:慢病毒介導(dǎo)的沉默CTSS可以顯著誘導(dǎo)MHCC97-H細(xì)胞的凋亡和增加化學(xué)藥物