Toll樣受體信號(hào)通路對(duì)異種心臟移植中的心肌細(xì)胞凋亡影響的初步研究.pdf

1、目的：在心臟移植后，急性血管性排斥反應(yīng)導(dǎo)致心肌細(xì)胞間質(zhì)出血、水腫，周圍中性粒細(xì)胞浸潤，血管內(nèi)皮細(xì)胞死亡，最終細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)擬研究Toll樣受體通路及其下游通路核因子-κB（NF-κB）在心肌細(xì)胞凋亡中的作用。
　　方法：在體外培養(yǎng)C57BL6小鼠的心肌細(xì)胞及SD大鼠和BALB/C小鼠的脾細(xì)胞。在體外建立C57BL6小鼠到BALB/C小鼠和SD大鼠的心臟移植細(xì)胞模型。將實(shí)驗(yàn)分為六組，A組：C57BL6小鼠心肌細(xì)胞+PBS液(PBS

2、組)；B組：C57BL6小鼠心肌細(xì)胞+TNF-α(TNF-α組)；C組：C57BL6小鼠心肌細(xì)胞+BALB/C小鼠脾細(xì)胞(Mouse SC組)；D組：C57BL6小鼠心肌細(xì)胞+BALB/C小鼠脾細(xì)胞+BALB/C小鼠血清(Mouse SC+S組)；E組：C57BL6小鼠心肌細(xì)胞+SD大鼠脾細(xì)胞(Rat SC組)；F組：C57BL6小鼠心肌細(xì)胞+SD大鼠脾細(xì)胞+SD大鼠血清(Rat SC+S組)，共培養(yǎng)時(shí)間為108h。運(yùn)用Annexin-

3、V/PI法檢測各組C57BL6小鼠心肌細(xì)胞凋亡，比較同種和異種免疫原對(duì)心肌細(xì)胞刺激效應(yīng)的差別。RT-PCR法檢測A組、C組、D組、E組、F組心肌細(xì)胞TLR-1、TLR-2、TLR-3、TLR-4、TLR-5、TLR-7、TLR-9的表達(dá)，篩選出被激活的Toll樣受體。利用相應(yīng)的Toll樣受體的阻斷抗體抑制激活的Toll樣受體，Annexin-V/PI法檢測心肌細(xì)胞凋亡，Western-blot法檢測其下游通道NF-κB的表達(dá)變化。

4、>　　結(jié)果：運(yùn)用酶消化法培養(yǎng)C57BL6小鼠的心肌細(xì)胞，細(xì)胞活性好，純度達(dá)80-90％。供心心肌細(xì)胞凋亡檢測實(shí)驗(yàn)中，TNF-α組、Rat SC組、Rat SC+S組的心肌細(xì)胞凋亡比例達(dá)71.31±7.71%、70.05±5.73%、68.61±4.71%，與PBS組、Mouse SC組、Mouse SC+S組相比，心肌細(xì)胞凋亡程度有明顯差異（P<0.001）。檢測未經(jīng)處理的C57BL6小鼠心肌細(xì)胞的各Toll樣受體信號(hào)的表達(dá)，均在相對(duì)較

5、低水平，呈靜息狀態(tài)。各實(shí)驗(yàn)組中，在Rat SC組和 Rat SC+S組心肌細(xì)胞的TLR-2和 TLR-3的表達(dá)明顯增高（P<0.05），其中 TLR-3的增高更加明顯（P<0.05）。運(yùn)用 TLR-3抗體來抑制心肌細(xì)胞TLR-3信號(hào)通路后，供心心肌細(xì)胞的凋亡比例減少（P<0.05），NF-κB p65蛋白的表達(dá)量降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：1.在小鼠-大鼠心臟移植細(xì)胞模型中，TLR-2和TLR-3是異種免疫原誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋