基于JAK2-STAT5-PPARγ通路探討石斛合劑序貫法防治糖尿病肝損傷及肝纖維化的分子機制.pdf

1、目的：
　　觀察石斛合劑序貫方對糖尿病肝損傷及肝纖維化大鼠肝組織JAK2/STAT5/PPARγ信號通路相關蛋白及基因表達的影響，為石斛合劑序貫法防治糖尿病合并肝損傷及肝纖維化提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　Wistar大鼠（體重200g左右，SPF級，雌性）60只，適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分為正常組10只和造模組50只。正常組予普通飼料喂養(yǎng)，造模組予高糖膳食飼料喂養(yǎng)4周后，腹腔注射2次STZ(25 mg/kg+m2，間

2、隔72h)，隨機選取T2DM成模的大鼠30只隨機分為模型對照組、二甲雙胍組、石斛合劑序貫組各10只并腹腔注射ConA(12.5mg/kg，qw)，正常組注射磷酸鹽緩沖液，9周后停止腹腔注射。各組統(tǒng)一于T2DM成模分組后第3天灌胃，每周稱重1次，根據(jù)體重調整灌胃藥量。于灌胃后22周末取材，肝組織行Masson和HE染色、免疫組化測肝組織PPARγ表達量，qPCR和Western blot檢測大鼠肝臟CollagenⅠ、JAK2和STAT5

3、、RXRα、PPARγ的蛋白及mRNA相對表達量。
　　結果：
　　1、大鼠一般情況觀察:整個實驗過程中因造模死亡大鼠1只。正常組實驗大鼠一般狀況良好。各造模組一般情況較差，在藥物治療后，一般情況較前好轉。
　　2、大鼠空腹血糖變化:藥物干預前，與正常組比，模型組、二甲雙胍組及石斛合劑序貫組的空腹血糖均顯著升高且＞11.1mmol/L(P＜0.01)，模型組、二甲雙胍組及石斛合劑序貫組每兩組之間空腹血糖無差異(P＞0.

4、05）;藥物干預后，與模型組比，石斛合劑序貫組的空腹血糖顯著降低(P＜0.01）。
　　3、大鼠肝功能變化:藥物干預前，與正常組比，模型組、二甲雙胍組及石斛合劑序貫組AST、ALT均明顯升高(P＜0.05);模型組、二甲雙胍組及石斛合劑序貫組每兩組之間AST、ALT無差異(P＞0.05)。藥物干預后，與模型組比，石斛合劑序貫組的ALT、AST明顯降低(P＜0.01）。
　　4、大鼠血清透明質酸、層粘連蛋白變化:藥物干預后，與

5、正常組比，模型組的HA、LN顯著升高（P＜0.01）;與模型組比，石斛合劑序貫組的HA、LN均下降(P＜0.05），與正常組比，石斛合劑序貫組的HA較高(P＞0.05)。
　　5、大鼠肝組織Masson染色:正常組僅有少量膠原蛋白表達于中央靜脈壁及匯管區(qū)。模型組肝組織匯管區(qū)及周圍可見大量膠原纖維沉積。與模型組相比，石斛合劑序貫組和二甲雙胍組的匯管區(qū)膠原沉積顯著減少。
　　6、大鼠肝組織PPARγ免疫組織化學:與模型組比較，正

6、常組PPARγ蛋白陽性著色呈細胞核均勻深棕色，在肝組織中分布較廣泛;模型組的細胞核基本未出現(xiàn)陽性著色;石斛合劑序貫組細胞較模型組明顯增多，但較正常組細胞的陽性著色較淺。
　　7、大鼠肝組織JAK2、STAT5、PPARγmRNA的表達:藥物干預后，與正常組比，模型組JAK2、STAT5、PPARγ表達顯著下降（P＜0.01）;與模型組比，石斛合劑序貫組的JAK2、STAT5、PPARγ表達升高(P＜0.05）。
　　8、大鼠

7、肝組織JAK2、STAT5、RXRα、PPARγ的蛋白表達:與正常組比，模型組的CollagenⅠ的表達量升高（P＜0.05），T-JAK2、T-STAT5、P-STAT5、PPARγ、RXRα的表達量降低（P＜0.05），P-JAK2表達量下降，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）;與模型組比，石斛合劑序貫組CollagenⅠ表達量顯著下降(P＜0.01）;石斛合劑序貫組T-JAK2、P-STAT5、RXRα的表達量顯著升高(P＜0.0