西格列汀對(duì)阿托伐他汀攝取量的影響及其改變OATP1B1表達(dá)的研究.pdf

1、目的：證實(shí)阿托伐他汀可以通過(guò) OATP1B1進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)，探討西格列汀(SIG)對(duì)阿托伐他汀(ATV)在293T細(xì)胞內(nèi)藥物蓄積的影響，明確2個(gè)藥物聯(lián)合應(yīng)用后是否可以影響彼此在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)，為二藥在臨床的聯(lián)合應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：構(gòu)建OATP1B1真核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞后用G418篩選，建立OATP1B1過(guò)表達(dá)293T細(xì)胞，用免疫印跡確認(rèn)細(xì)胞OATP1B1表達(dá)水平，并標(biāo)記為293T1B1；
　　建立有效的液相

2、色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（LC-MS/MS）定量分析細(xì)胞內(nèi)阿托伐他汀的方法；
　　將西格列汀和阿托伐他汀單獨(dú)或者聯(lián)合給予293T1B1細(xì)胞后，處理不同時(shí)間點(diǎn)，取細(xì)胞并獲得細(xì)胞裂解液，萃取后采用 LC-MS/MS定量分析細(xì)胞內(nèi)阿托伐他汀濃度，并與未轉(zhuǎn)染的HEK293T為對(duì)照，考察阿托伐他汀的細(xì)胞內(nèi)蓄積濃度，以及考察西格列汀對(duì)阿托伐他汀細(xì)胞內(nèi)蓄積水平的影響。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了OATP1B1真核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞以后48小時(shí)

3、可以檢測(cè)到 OATP1B1表達(dá)，利用 G418進(jìn)行壓力篩選后獲得能穩(wěn)定高表達(dá)OATP1B1的293T細(xì)胞；
　　在高濃度時(shí)，阿托伐他汀對(duì)293T細(xì)胞有一定的抑制作用，西格列汀沒(méi)有抑制作用。而在較低濃度下，兩藥都對(duì)細(xì)胞增殖無(wú)顯著影響；
　　成功建立了針對(duì)細(xì)胞裂解中阿托伐他汀的LC-MS/MS定量分析方法，該方法快速、穩(wěn)定、定量限低，適用于阿托伐他汀測(cè)定的實(shí)際工作；
　　隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng)，阿托伐他汀單藥在細(xì)胞內(nèi)的濃度隨時(shí)

4、間增加而增加。2藥合用組中，隨著西格列汀的加入的濃度增加，阿托伐他汀在293T1b1細(xì)胞中的蓄積進(jìn)一步增加。差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　免疫印跡實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示西格列汀可一定程度上調(diào)OATP1B1的表達(dá)水平。
　　結(jié)論：阿托伐他汀在肝細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)水平與OATP1B1有關(guān)，當(dāng)加入西格列汀后，可在一定程度上增加阿托伐他汀的轉(zhuǎn)運(yùn)。而且西格列汀影響阿托伐他汀在肝細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制可能與西格列汀上調(diào)OATP1B1有關(guān)，西格列汀和阿托伐他汀具有潛