半乳糖化膽固醇配體介導(dǎo)的多烯紫杉醇脂質(zhì)體的藥物動(dòng)力學(xué)及其組織分布研究.pdf

1、目的：半乳糖化膽固醇配體(5-cholesten-3β-yl)[(4-O-β-D-galactopyranosyl)D-glucitol-6] decanedioic acid(CHS-DD-LA)是本實(shí)驗(yàn)室采用新型非水相脂肪酶催化手段合成的一種半乳糖配體。該配體能被存在于肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞上的去唾液酸糖蛋白受體(ASGP-r)[1]特異性識(shí)別，可作為肝靶向給藥系統(tǒng)的靶頭用于肝靶向給藥系統(tǒng)如脂質(zhì)體，聚合物膠束等微粒給藥系統(tǒng)的制備。本實(shí)驗(yàn)室已成功

2、制備了多烯紫杉醇脂質(zhì)體，在此工藝基礎(chǔ)上加入該半乳糖化膽固醇配體，進(jìn)一步制備得到具有肝靶向的多烯紫杉醇配體脂質(zhì)體。經(jīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考察，該配體介導(dǎo)的脂質(zhì)體各項(xiàng)指標(biāo)都在藥典規(guī)定的范圍內(nèi)。本論文旨在對(duì)該配體脂質(zhì)體的大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)特征進(jìn)行了考察并通過組織分布研究考察了其在小鼠體內(nèi)的肝靶向性效果，通過LC-MS/MS建立了血漿及組織樣品中多烯紫杉醇含量的測(cè)定方法。為新藥報(bào)批及進(jìn)一步非臨床研究提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：⑴以紫杉醇為內(nèi)標(biāo)，采用L

3、C-MS/MS法，建立血漿及組織等生物樣品中多烯紫杉醇含量測(cè)定的方法。⑵選用SD大鼠為動(dòng)物模型，分別進(jìn)行多烯紫杉醇配體脂質(zhì)體不同劑量的藥動(dòng)學(xué)研究，選取的劑量分別是:2.5mg·kg-1、5mg·kg-1、7.5mg·kg-1?？疾鞎r(shí)間為:0.083h、0.25h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、10h、24h。得到多烯紫杉醇肝靶向配體脂質(zhì)體低、中、高三個(gè)不同劑量的藥動(dòng)參數(shù)。根據(jù)不同劑量的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，選取出最適劑量，設(shè)置多烯紫杉醇

4、配體脂質(zhì)體，多烯紫杉醇普通脂質(zhì)體，多烯紫杉醇注射液三個(gè)不同制劑組，比較三種不同制劑的藥動(dòng)學(xué)特征。用DAS2.0軟件繪制藥動(dòng)學(xué)曲線。⑶選用KM小鼠為動(dòng)物模型，考察多烯紫杉醇配體脂質(zhì)體在小鼠體內(nèi)的的組織分布特征。設(shè)置多烯紫杉醇配體脂質(zhì)體，多烯紫杉醇普通脂質(zhì)體，多烯紫杉醇注射液三個(gè)不同制劑組進(jìn)行比較。考察時(shí)間為:5min、10min、20min、30min、60min、120min、240min。引入4種肝靶向參數(shù):相對(duì)攝取率(Relativ

5、e intake efficiency Re)，靶向效率(Targeting efficiency Te)，相對(duì)靶向效率(Relative targetingefficiency RTe)，峰濃度比(Peak concentraton efficiency Ce)用以衡量該制劑的靶向性。
　　結(jié)果：①建立了以LC-MS/MS為方法的血漿樣品、組織樣品中多烯紫杉醇含量的檢測(cè)。以紫杉醇為內(nèi)標(biāo)，其專屬性、標(biāo)準(zhǔn)曲線、準(zhǔn)確度、精密度、重復(fù)率

6、、基質(zhì)效率等方面的考察數(shù)據(jù)表明該檢測(cè)方法具有穩(wěn)定性好，精密度高，準(zhǔn)確性好、效率高等優(yōu)點(diǎn)。通過提取回收率的考察篩選出了血漿及組織樣品處理的最佳方案。②大鼠單次尾靜脈注射多烯紫杉醇配體脂質(zhì)體2.5 mg·kg-1、5 mg·kg-1、7.5 mg·kg-1三種不同劑量后，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Cmax、AUC呈明顯的劑量正相關(guān)性，而t1/2、CL等與劑量的相關(guān)性不顯著。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要及合理性選擇低劑量2.5mg·kg-1進(jìn)行多烯紫杉醇配體脂質(zhì)體、多烯紫杉

7、醇普通脂質(zhì)體、多烯紫杉醇注射液三種不同制劑的藥動(dòng)學(xué)結(jié)果比較。三種不同制劑按2.5mg·kg-1劑量給藥后分布半衰期t1/2α(h)分別為0.13±0.027，0.06±0.012,0.02±0.007; CL分別為1.71±0.164,2.31±0.118,4.08±0.803;平均滯留時(shí)間MRT分別為2.46±0.089，2.10±0.121，1.67±0.212。③小鼠單次尾靜脈注射三種不同制劑后，多烯紫杉醇配體脂質(zhì)體、多烯紫杉醇普

8、通脂質(zhì)體的靶向參數(shù)Re分別為5.478±0.621，1.642±0.124;RTe為4.823±0.291，1.843±0.086; Ce為3.888±0.140，1.792±0.097。多烯紫杉醇配體脂質(zhì)體、多烯紫杉醇普通脂質(zhì)體、多烯紫杉醇注射液的Te(％)分別為59.560±3.01122.754±0.804,12.349±0.338。
　　結(jié)論：⑴采用LC-MS/MS測(cè)定血漿及組織樣本中多烯紫杉醇的含量，該方法操作簡(jiǎn)單方便，

9、靈敏度高，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，效率高，節(jié)約環(huán)保，為該課題的進(jìn)一步研究提供了有效地檢測(cè)方法。⑵大鼠不同劑量的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)表明多烯紫杉醇配體脂質(zhì)體在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過程基本符合二室模型，高劑量時(shí)其參數(shù)AUC與Cmax呈明顯劑量相關(guān)性，而t1/2、 CL等與劑量的相關(guān)性不顯著，表明配體脂質(zhì)體在大鼠體內(nèi)未出現(xiàn)非線性藥動(dòng)學(xué)特征。與多烯紫杉醇注射液及多西紫杉醇普通脂質(zhì)體相比其t1/2α、MRT、V1均降低，CL升高，表明經(jīng)半乳糖配體修飾后，脂質(zhì)體在大鼠