奧氮平在SD大鼠主動口服模型中的藥代動力學(xué)研究.pdf

1、背景：奧氮平作為主流的非典型抗精神病藥物之一，通過作用大腦中的多巴胺和五羥色胺受體治療認(rèn)知障礙，陰、陽性精神病等疾病。然而，長期服用奧氮平會使病人產(chǎn)生肥胖、糖尿病、胰島素抵抗、高血脂癥等一系列副作用疾病，影響病人的生活質(zhì)量和對藥物的耐受性。多年來，研究人員們針對奧氮平的體內(nèi)作用機制進行了大量研究。許多研究利用動物模型類似于人的特性對奧氮平的分子機制進行探索，并揭示了部分過程。其中注射和灌胃是奧氮平大鼠模型的兩種主要給藥方式。但是，這兩種

2、給藥方式很可能對大鼠造成壓力波動甚至是生理傷害，從而影響研究結(jié)果，這類問題在長期給藥實驗中特別明顯。此外，臨床奧氮平的主要服藥方式是口服，大鼠模型中不同于臨床給藥所方式產(chǎn)生的藥物代謝動力學(xué)（pharmacokinetic,PK）參數(shù)的區(qū)別也很大，極有可能會給奧氮平的研究結(jié)果帶來各方面的影響和偏差。因此，模擬奧氮平臨床服藥方式的主動口服大鼠模型應(yīng)運而生，該模型通過訓(xùn)練大鼠主動吞服奧氮平，減少外界因素對大鼠造成的干擾和傷害，使研究能夠獲得單

3、純的奧氮平作用變化機制。體內(nèi)藥代動力學(xué)研究是設(shè)計和優(yōu)化動物模型的關(guān)鍵，盡管已有研究運用奧氮平主動口服大鼠模型獲得了一些機制研究的結(jié)論，但是現(xiàn)有研究報道尚無針對奧氮平主動口服大鼠模型的體內(nèi)PK過程的研究，也就沒有數(shù)據(jù)能明確證明該模型對奧氮平臨床狀態(tài)模擬的有效性和優(yōu)越性。此外，一些奧氮平分子機制研究結(jié)果由于大鼠模型給藥方式和給藥劑量的不同而顯示出了差異性的研究結(jié)果，這說明藥物劑量和單日給藥次數(shù)的選擇也是構(gòu)建良好動物模型時需要特別關(guān)注的。

4、r>　　目的：
　　1、模擬奧氮平臨床主要服藥方式，構(gòu)建奧氮平主動口服大鼠模型，對單多次給藥狀態(tài)下的主動口服大鼠模型進行PK研究。
　　2、優(yōu)化奧氮平主動口服大鼠模型，確定最佳的臨床模擬給藥劑量和服藥間隔，盡可能的模擬臨床奧氮平治療狀態(tài)下的體內(nèi)PK過程和藥物作用狀態(tài)，減少其他干擾對奧氮平分子機制的影響，獲得盡可能單純的奧氮平作用過程，證明該模型對奧氮平臨床狀態(tài)模擬的有效性和優(yōu)越性，使該模型適用于奧氮平藥理和副作用研究。

5、>　　方法：
　　1、建立檢測大鼠體內(nèi)奧氮平濃度的HPLC方法，并進行方法學(xué)驗證；
　　2、運用該HPLC檢測法對模型大鼠血漿，肝臟和大腦（各功能核團）中的奧氮平濃度進行檢測；
　　3、運用PK統(tǒng)計軟件DAS對獲得的奧氮平濃度數(shù)據(jù)進行PK參數(shù)計算；
　　4、通過RT-qPCR技術(shù)檢測奧氮平主要靶受體D2和5-HT2C的轉(zhuǎn)錄水平變化。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠血漿，肝臟和大腦中奧氮平濃度檢測的HPLC方

6、法學(xué)研究。
　　奧氮平和內(nèi)標(biāo)2-萘酚的專屬性良好，保留時間為15.4和20.2min。奧氮平在大鼠血漿、肝臟和大腦這三種組織中的標(biāo)準(zhǔn)曲線R2＞0.99，符合檢測要求，回收率均在85％～115%之間，批間、批內(nèi)精密度均小于15%，批間、批內(nèi)準(zhǔn)確度均在100±10%以內(nèi)，穩(wěn)定性變異系數(shù)小于10%。結(jié)果證明本分析方法符合我國和FDA藥典對生物樣品測定的要求，在檢測SD大鼠血漿、大腦和肝臟中奧氮平濃度時準(zhǔn)確、可靠，適用于奧氮平在SD大鼠體

7、內(nèi)的含量測定。
　　2.主動口服大鼠模型中，奧氮平單次給藥的PK研究。
　　急性研究顯示，6mg/kg/day給藥濃度下的奧氮平在大鼠的血漿、肝臟和大腦中存在著相似的吸收代謝規(guī)律。給藥后15min即可在三種組織中檢測到奧氮平濃度，其在血漿、大腦和肝臟中的血藥濃度達峰時間（Tmax）均在0.75h左右，藥峰濃度（Cmax）分別為298.80ng/mL、1285.5ng/g和3055.85ng/g，半衰期（t1/2）依次為3.3

8、5、5.68和6.76h。此外，不同的給藥濃度也在大鼠體內(nèi)表現(xiàn)出了接近的Tmax和t1/2：1mg/kg/day和3mg/kg/day給藥濃度下，奧氮平的Tmax均在0.75h左右；t1/2分別為3.32h和3.69h，與6mg/kg/day給藥濃度下的Tmax和t1/2接近.。1mg/kg/day和3mg/kg/day給藥濃度下的Cmax依次檢測為134.88ng/mL和192.67ng/mL。
　　3.主動口服大鼠模型中，奧氮

9、平多次給藥的PK研究。
　　3mg/kg/day（t.i.d）給藥濃度下，奧氮平在SD大鼠血漿中的Tmax為11.33h，Cmax為141.04ng/mL，t1/2為3.46h。該模型的Cmax介于1、3mg/kg/day單次給藥模型的血漿Cmax之間，t1/2則與單次給藥模型接近，Tmax則由于奧氮平的蓄積顯示在最后一次給藥之后。本模型盡可能的降低了血藥濃度的Cmax值，同時增加了奧氮平在大鼠體內(nèi)的吸收過程，延長了奧氮平在大鼠體

10、內(nèi)的滯留時間，成功模擬了臨床奧氮平血藥濃度穩(wěn)態(tài)。
　　4.多次給藥大鼠模型中，奧氮平組織濃度分布和受體轉(zhuǎn)錄水平研究。
　　3mg/kg/day（t.i.d）主動給藥大鼠模型中，奧氮平在肝臟中的濃度最高，為2145ng/g。而奧氮平在不同大腦核團的濃度區(qū)別很大，濃度從大到小依次是Cg、海馬、CPu、小腦、Arc-VMH、Acb、腦干和PFC。轉(zhuǎn)錄水平檢測結(jié)果顯示，在奧氮平的作用下，5-HT2C和 D2這兩個基因的mRNA表達量

11、，在海馬體和CPu中均下調(diào)（P<0.05）。
　　結(jié)論：本課題通過模擬臨床奧氮平主要服藥方式（口服），構(gòu)建奧氮平主動口服大鼠模型，并對該模型進行單、多次給藥的PK研究，獲得了3mg/kg/day（t.i.d.）主動口服給藥大鼠優(yōu)化模型。該優(yōu)化模型在模擬臨床奧氮平作用狀態(tài)上具備模擬有效性和優(yōu)越性，不僅可以模擬臨床主要服藥方式，也盡可能的模擬臨床奧氮平治療濃度下的體內(nèi)PK過程和藥物作用狀態(tài)，減少其他干擾對奧氮平分子機制的影響，該優(yōu)化模