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文檔簡介
1、目的： 利用模式生物果蠅表達PCL重組蛋白復(fù)合物，檢測、純化所表達的PCL蛋白，為研究PCL蛋白復(fù)合物的生物學(xué)活性及其在胚胎不同發(fā)育時期的作用提供依據(jù)。 方法： PCL基因經(jīng)PCR擴增后，重組到pCaS83 HHF_PresCT載體，構(gòu)建pCaS83 PCL_c表達載體。經(jīng)顯微注射果蠅胚胎，該表達載體整合于果蠅生殖細胞的基因組上，并建立PCL轉(zhuǎn)基因果蠅系。 我們利用轉(zhuǎn)基因果蠅系表達PCL蛋白，并進行多線染
2、色體的免疫組化分析，檢測PCL蛋白的表達。應(yīng)用免疫沉淀法對PCL蛋白進行純化，并分析其生物學(xué)功能。 結(jié)果： 建立了表達重組PCL蛋白復(fù)合物的轉(zhuǎn)基因果蠅系。盡管不同轉(zhuǎn)基因果蠅系的PCL蛋白表達水平并不相同，但所表達的重組PCL蛋白與內(nèi)源性蛋白具有相似的分布特征，并能部分代償缺陷型PCL蛋白的功能。因為PCL重組蛋白復(fù)合物的C-末端帶有HA-8xHis-FLAG標記，所以可以利用抗FLAG抗體純化轉(zhuǎn)基因果蠅系不同發(fā)育時期的P
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