TrkB-BDNF信號通過SIRT1負向調(diào)控p53-Unc5H4表達介導NB細胞對順鉑耐藥.pdf

1、目的:
　　神經(jīng)母細胞瘤(neuroblastoma，NB)是兒童最常見的惡性腫瘤，嚴重威脅著兒童的健康和生命，是基礎(chǔ)研究和臨床治療亟待解決的難題之一。目前手術(shù)結(jié)合化療、放療仍為NB治療的三大主要手段，但治療效果不佳，其中耐藥復發(fā)是導致NB患者死亡的主要原因。因此闡明NB多藥耐藥機制對提高患者的治療效果具有極其重大的意義。本實驗以入神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞系為研究對象，利用全反式維甲酸(all trans-retinoic

2、acid，ATRA)誘導酪氨酸激酶受體B(tyrosine kinasereceptor B，TrkB)高表達，使用腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophicfactor，BDNF）刺激，檢測SIRT1、p53、ac-p53、Unc5H4蛋白表達水平以及細胞對化療藥物順鉑(cisplatin，CDDP)敏感性的變化;通過SIRT1抑制劑尼克酰胺(nicotinamide，NAM)干預，靶向抑制SIRT1的表

3、達和活性，檢測p53、ac-p53、Unc5H4表達變化以及細胞對CDDP敏感性的變化。
　　研究方法:
　　常規(guī)培養(yǎng)人神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞系，取對數(shù)生長期細胞利用ATRA誘導TrkB高表達，根據(jù)分組要求依次加入NAM、BDNF、CDDP處理。具體分組如下:Western blot實驗:A:對照組;B: ATRA+BDNF組;C:ATRA+NAM+BDNF組，檢測各組TrkB、SIRT1、p53、ac-p53、Un

4、c5H4蛋白表達水平變化。MTT比色法、流式細胞術(shù):A:對照組;B: CDDP組;C:ATRA+BDNF+CDDP組;D: ATRA+NAM+BDNF+CDDP組，MTT比色法檢測加入CDDP后0h、24h、48h各組細胞存活率，流式細胞術(shù)檢測加入CDDP后24h細胞凋亡率。
　　結(jié)果:
　　Western blot實驗:與A組細胞相比，B組細胞TrkB、SIRT1蛋白表達明顯增加(P＜0.05)，p53、ac-p53及Un

5、c5H4蛋白表達明顯減少(P＜0.05);與A、B組細胞相比，C組細胞SIRT1蛋白表達明顯減少(P＜0.05)，p53、ac-p53及Unc5H4表達明顯增加(P＜0.05)。MTT比色法、流式細胞術(shù):與A組細胞相比，B、C、D組細胞存活率明顯降低(P＜0.05)，細胞凋亡率明顯增加(P＜0.05);與B組細胞相比，C組細胞存活率明顯增加(P＜0.05)，細胞凋亡率明顯降低(P＜0.05);與B、C組相比，D組細胞存活率明顯降低(P＜