GPX2在肺癌A549細(xì)胞中通過調(diào)控ROS調(diào)節(jié)TGF-β誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)化.pdf

1、目的:檢測在肺癌A549細(xì)胞中抑制GPX2的基因表達(dá)對TGF-β誘導(dǎo)的EMT和侵襲轉(zhuǎn)移的影響，并對其機(jī)制進(jìn)行研究。
　　方法:以肺癌A549細(xì)胞為研究對象，將細(xì)胞分為對照組和TGF-β處理組，用Real-time定量PCR和Western blot技術(shù)檢測對照組與TGF-β處理組細(xì)胞EMT各項(xiàng)指標(biāo)的變化和GPX2基因的表達(dá)水平；顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)。采用小分子RNA干擾技術(shù)干擾GPX2基因表達(dá)，運(yùn)用Real-time定量PCR

2、技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測分別比較各組細(xì)胞EMT相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)情況。transwell和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生情況。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測組織標(biāo)本中GPX2的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:經(jīng)TGF-β處理后的A549細(xì)胞與對照組比較，細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生ROS的量增加，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯的間質(zhì)改變，遷移及侵襲能力明顯增強(qiáng)；在mRNA水平及蛋白水平，TGF-β處理組的A549細(xì)胞內(nèi)E-cadher

3、in的表達(dá)量明顯下調(diào)，同時(shí)該組細(xì)胞的N-cadherin及Vimentin表達(dá)均明顯增高。TGF-β處理組的A549細(xì)胞GPX2基因表達(dá)在mRNA及蛋白水平均較對照組明顯下調(diào)。在肺癌組織標(biāo)本中GPX2高表達(dá)。在A549細(xì)胞中用shRNA沉默GPX2基因后，細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生增加；在mRNA及蛋白水平，E-cadherin的表達(dá)水平降低，Vimentin的表達(dá)升高，A549細(xì)胞的遷移及侵襲能力明顯增強(qiáng)，p-Erk1/2被激活。
　　結(jié)