食管鱗癌患者血漿cfDNA與臨床病理特征及新輔助化療應(yīng)答相關(guān)性的研究.pdf

1、世界范圍內(nèi)食管癌的發(fā)病率依然在升高，在我國(guó)等發(fā)展中國(guó)家中，近十年來食管癌的發(fā)病率依然居高不下，并且在亞洲地區(qū)食管癌組織類型以鱗狀細(xì)胞癌為主要類型。手術(shù)切除、化療和放療依然是目前食管癌的主要治療手段，盡管近幾十年食管癌治療手段取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，但是治療效果依然欠佳，這主要?dú)w因于早期食管癌缺乏特異性的臨床癥狀和體征，同時(shí)缺乏準(zhǔn)確的生物學(xué)標(biāo)志物，這導(dǎo)致食管癌發(fā)現(xiàn)伊始便是中晚期。對(duì)于中晚期的食管癌患者，單純的手術(shù)治療無法達(dá)到生物學(xué)意義上的根治，

2、多學(xué)科綜合治療成為中晚期腫瘤患者主要治療方式。新輔助化療及靶向治療作為近年來一種廣受關(guān)注的治療手段，尤其在進(jìn)展期食管癌中，其臨床價(jià)值已經(jīng)逐漸獲得廣泛認(rèn)可，但是對(duì)其療效評(píng)估和患者群體選擇依然存在很多爭(zhēng)議。當(dāng)前在食管癌診斷和監(jiān)測(cè)中仍然缺乏有效的生物學(xué)標(biāo)志物。在第二代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展下，使用日益完善的各類新型技術(shù)手段，探尋新的化療療效評(píng)估標(biāo)志物，無創(chuàng)、精確、高效的對(duì)食管癌患者進(jìn)行預(yù)測(cè)與分類，是精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)指導(dǎo)下食管癌多學(xué)科綜合治療的熱點(diǎn)方向，具有重

3、要的臨床意義。
　　目前，多項(xiàng)研究結(jié)果提示游離DNA(cell free DNA，cfDNA)在肺癌、結(jié)直腸癌、肝癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤患者的外周血中存在，并且與腫瘤負(fù)荷及預(yù)后相關(guān)，但在食管癌中應(yīng)用價(jià)值的研究較少。近年已有研究報(bào)道食管癌患者的外周血中可以檢測(cè)到腫瘤相關(guān)的cfDNA，并且血漿cfDNA檢測(cè)可以作為評(píng)價(jià)食管癌手術(shù)效果的非侵襲性的生物標(biāo)志物，而基于第二代測(cè)序技術(shù)的cfDNA檢測(cè)用于預(yù)測(cè)食管癌患者的化療療效和預(yù)后的研究還

4、未見報(bào)道。本研究擬通過監(jiān)測(cè)食管癌患者初治時(shí)外周血中cfDNA的含量及食管癌相關(guān)突變基因的檢測(cè)，研究cfDNA與食管鱗癌患者臨床特征及病理學(xué)特征之間的關(guān)系，同時(shí)根據(jù)食管鱗癌外周血cfDNA中腫瘤相關(guān)基因變化情況作為食管癌患者化療療效和預(yù)后評(píng)估的伴隨診斷指標(biāo)的潛在可能。
　　第一部分食管鱗癌患者血漿游離DNA含量與患者臨床及病理學(xué)特征相關(guān)性的研究
　　目的:
　　初步探討食管鱗癌患者血漿cfDNA含量與患者臨床病理特征的相

5、關(guān)性。
　　方法:
　　收集2015年1月-2015年3月河南省腫瘤醫(yī)院胸外科一區(qū)收治的食管鱗癌患者初治時(shí)血漿樣本共30例。采用磁珠兩步法提取患者血漿cfDNA，分析血漿cfDNA含量和患者臨床及病理學(xué)特征的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　納入本研究的30例食管癌患者中，所有患者cfDNA以Nanodrop法定量分析，檢測(cè)成功率為100％，測(cè)得30例食管癌患者血漿cfDNA濃度為0.182±0.107ng/ul(0.0

6、9-0.51ng/ul)，其中≥60歲、＜60歲兩組食管癌患者血漿游離DNA濃度分別為0.188±0.104ng/ul、0.174±0.116ng/ul(p=0.764);男性患者、女性患者血漿cfDNA濃度分別為0.178±0.094ng/ul、0.210±0.188ng/ml(p=0.058);有和沒有吸煙史的食管鱗癌患者血漿cfDNA濃度分別為0.184±0.1040ng/ul和0.180±0.115ng/ul(p=0.823);

7、有和沒有飲酒史的食管鱗癌患者血漿cfDNA濃度分別為0.184±0.108ng/ul和0.181±0.109ng/ul(p=0.830);有和沒有惡性腫瘤家族病史的食管癌患者血漿cfDNA濃度分別為0.208±0.155ng/ul和0.176±0.095ng/ul(p=0.097);食管胸上、中、下段癌患者血漿cfDNA濃度分別為:0.231±0.045ng/ul、0.161±0.067ng/ul和0.130±0.018ng/ul(p=

8、0.559);Ⅱa、Ⅱb、Ⅲa、Ⅲb期食管鱗癌患者血漿cfDNA濃度分別為0.184±0.108ng/ul、0.178±0.094ng/ul、0.181±0.109ng/ul、0.161±0.067ng/ul(p=0.102);高、中、低分化的三組患者血漿cfDNA濃度分別為0.157±0.078ng/ul、0.185±0.110ng/ul、0.199±0.131ng/ul(p=0.449);按T1-2和T2-4分組，兩組患者的血漿游離

9、DNA濃度分別為0.175±0.122ng/ul和0.186±0.186ng/ul(p=0.964)有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血漿cfDNA濃度為0.168±0.063ng/ul、0.193±0.132ng/ul(p=0.058);以腫瘤體積中位數(shù)將患者分為大腫瘤組和小腫瘤組，兩組患者的血漿cfDNA濃度分別為0.220±0.132ng/ul和0.145±0.056ng/ul(p=0.006)。通過相關(guān)性分析cfDNA水平與腫瘤TNM綜合分期

10、無相關(guān)性，與腫瘤體積大小呈正相關(guān)(r=0.381，P=0.038)。
　　結(jié)論:
　　食管鱗癌血漿cfDNA水平與其腫瘤負(fù)荷呈正相關(guān)，與患者性別、年齡、吸煙飲酒史、惡性腫瘤家族史、腫瘤部位、腫瘤侵潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及腫瘤分期無顯著性相關(guān)性。
　　第二部分化療敏感基因SNP聯(lián)合外周血ctDNA檢測(cè)對(duì)食管鱗癌患者新輔助化療優(yōu)勢(shì)人群篩選的價(jià)值
　　目的:
　　篩選食管鱗癌新輔助化療敏感基因SNP，初步探討聯(lián)

11、合多基因SNP和ctDNA對(duì)患者化療敏感性進(jìn)行預(yù)測(cè)的可行性，從而進(jìn)行藥物的合理選擇，為實(shí)現(xiàn)食管癌患者個(gè)體化新輔助化療提供重要的理論依據(jù)。
　　方法:
　　回顧性分析2016年3月至2016年5月期間在河南省腫瘤醫(yī)院胸外科一區(qū)進(jìn)行新輔助化療的患者的臨床資料，納入新輔助化療療效評(píng)價(jià)為CR/PR和PD/SD的患者各7例，收集兩組患者的相關(guān)臨床資料和病理學(xué)資料，從河南省腫瘤醫(yī)院胸外科生物標(biāo)本庫內(nèi)調(diào)取納入本研究的14例患者的血標(biāo)本。提

12、取血漿中游離DNA，分析化療敏感組和耐藥組患者的血漿cfDNA基因變異譜的差異。
　　結(jié)果:
　　化療敏感患者和化療不敏感患者血漿cfDNA中基因變異存在顯著性差異，且兩組患者的腫瘤基因突變負(fù)荷結(jié)果有顯著性差異(p=0.0062)，化療不敏感組具有較高的基因突變負(fù)荷。信號(hào)通路分析提示p53信號(hào)通路是化療敏感組及耐藥組腫瘤負(fù)荷差異基因富集最多的信號(hào)通路。化療敏感組和不敏感組患者外周血cfDNA基因拷貝數(shù)變化、差異性分析結(jié)果顯示