蛋氨酸腦啡肽聯合低劑量納曲酮治療胰腺癌作用的研究.pdf

1、胰腺癌是一種惡性程度極高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病隱匿，進展快，預后差，大約80％的患者確診時往往伴有局部的侵犯或者轉移，5年生存4％，胰腺癌的臨床治療主要以外科手術治療，放化療為主。蛋氨酸腦啡肽（methionine-enkephalin，MENK）是1975年Hughes等從豬腦提取液中分離出來具有內源性嗎啡樣活性的物質，人們發(fā)現其受體在免疫細胞以及某些腫瘤組織和正常組織細胞均有分布，MENK通過與免疫細胞上受體結合發(fā)揮免疫調節(jié)作用

2、，通過與腫瘤細胞上的受體結合發(fā)揮抑制腫瘤的作用。納曲酮(naltrexone，NTX)是美國杜邦公司1963年合成并研究開發(fā)的一種非選擇性阿片受體拮抗劑，能阻斷阿片類物質與阿片受體結合，人們發(fā)現間斷性的給予NTX6-8小時后，會出現一個18小時到72小時的窗口期，在窗口期內，腫瘤細胞受到抑制。與此同時，NTX在低劑量時具有免疫調節(jié)作用。因此，基于MENK與NTX直接抗腫瘤作用與激活免疫細胞間接抗腫瘤作用，本文將MENK與NTX聯合應用，

3、進行荷瘤小鼠的體內外試驗，通過對不同給藥劑量以及不同給藥時間的研究，從直接抗腫瘤與激活免疫系統(tǒng)間接抗腫瘤兩個角度進行研究，探討MENK與NTX聯合使用治療胰腺癌的可行性，為腫瘤臨床治療提供新的途徑。
　　實驗目的：
　　通過單獨應用MENK、NTX與聯合應用MENK與NTX的體內外實驗，探討MENK、NTX及二者聯合時對胰腺癌的抑制作用。
　　實驗方法：
　　1.體外實驗中，MTS方法檢測各實驗組中胰腺癌增殖細胞

4、的抑制情況;
　　2.體內實驗中，通過建立胰腺癌荷瘤小鼠模型，檢測各實驗處理組中胰腺癌的抑制情況。
　　3.WB法檢測荷瘤小鼠胰腺癌組織阿片受體蛋白表達量;
　　4.流式細胞術檢測荷瘤小鼠淋巴細胞亞群（CLT、Treg、NK、γδT）的增殖情況。
　　實驗結果：
　　1.在體外實驗中，MENK在濃度為10-6M時對胰腺癌細胞的抑制作用最強;NTX在濃度為10-5M時對胰腺癌細胞的抑制作用最強;二者相比較，M

5、ENK的作用更加顯著，具有統(tǒng)計學意義;
　　2.在體內實驗中，MENK與NTX聯合應用在48小時后與對照組相比較，具有統(tǒng)計學意義，在96小時與MENK組與NTX組相比較抑癌率升高，具有統(tǒng)計學意義;
　　3.在體內實驗中，在1次/24h的給藥方式下， MENK在劑量為20mg/kg時抑癌效果最顯著;NTX在劑量為5mg/kg時抑癌效果最顯著;MENK組與NTX組相比較作用更加顯著，具有統(tǒng)計學意義;
　　4.MENK與NT

6、X聯合應用時，MENK在劑量為20mg/kg/1次/24h與NTX在劑量為5mg/kg/1次/96h給藥方式時，抑癌效果最顯著，與對照組相比具有統(tǒng)計學意義;
　　5.Western-blot技術檢測荷瘤小鼠腫瘤組織阿片受體的蛋白的表達含量
　　NTX組與MENK+NTX組腫瘤組織阿片受體蛋白表達量增加， NTX組高于MENK+NTX組，具有統(tǒng)計學意義;
　　6.流式細胞技術檢測荷瘤小鼠淋巴細胞亞群增殖情況
　　M

7、ENK組、NTX組與MENK+NTX組都可以促進淋巴細胞亞群(CTL、NK、γδT)增殖，抑制Treg增殖，與對照組相比具有統(tǒng)計學意義;
　　實驗結論：
　　1、MENK在體內外能夠抑制胰腺癌細胞增殖，NTX在體內外能夠抑制胰腺癌細胞增殖，兩者相比MENK作用更加顯著;
　　2、MENK與NTX聯合應用，在NTX給藥72小時后具有協(xié)同作用
　　3、NTX在體內能夠上調腫瘤組織阿片受體的蛋白表達;
　　4、M