低劑量納曲酮對小鼠腹腔巨噬細胞功能調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、前言
　　納曲酮是一種非選擇性阿片受體拮抗劑，對μ-，δ-，κ-阿片受體均有阻斷作用。阿片受體是一類廣泛分布于神經(jīng)系統(tǒng)的膜受體，近年來發(fā)現(xiàn)阿片受體亦廣泛分布于免疫細胞上，其免疫調(diào)節(jié)作用日益受到有關(guān)學者的關(guān)注。納曲酮于1984年經(jīng)FDA批準上市，以50mg/d的劑量應用于海洛因和阿片成癮治療。近年來，有關(guān)低劑量納曲酮(4.5mg/d)的研究正在逐漸成為熱點。自1985年起，不同研究者開展的一系列臨床先導性研究表明，低劑量納曲酮對于諸

2、如克羅恩病、AIDS、某些腫瘤和多發(fā)性硬化癥等免疫相關(guān)疾病有著潛在的治療價值。巨噬細胞廣泛存在于機體組織中，是機體重要的免疫細胞，發(fā)揮著廣泛的免疫功能。經(jīng)典激活巨噬細胞有吞噬殺傷，釋放炎癥介質(zhì)，提呈抗原和調(diào)節(jié)并促進Th1型免疫的功能，可分泌較高水平的TNF-α、IL-12，以及合成大量的NO和H2O2，能有效的清除病原體和腫瘤細胞。腹腔巨噬細胞多游離存在于腹腔的腹水中，易于獲得，因此進行體外實驗時往往選用小鼠腹腔巨噬細胞為研究對象。目前

3、關(guān)于低劑量納曲酮對小鼠腹腔巨噬細胞是否存在活化作用，以及不同濃度的低劑量納曲酮對小鼠腹腔巨噬細胞的免疫調(diào)節(jié)是否存在差異這些方面的研究，國內(nèi)外未見報道。本研究利用體外培養(yǎng)的小鼠腹腔巨噬細胞，給予不同濃度的低劑量納曲酮刺激，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗等檢測手段，檢測相關(guān)指標并做出統(tǒng)計分析，旨在為后續(xù)的實驗室和臨床研究提供一些參考。
　　方法
　　所用實驗動物為清潔級6-8周齡雌性BALB/c小鼠，無菌灌洗提取腹腔巨噬細胞，貼壁純化培養(yǎng)

4、，鑒定合格后用于后續(xù)實驗。預實驗通過比對各濃度低劑量納曲酮刺激下巨噬細胞培養(yǎng)上清中NO水平確定低劑量納曲酮作用于小鼠腹腔巨噬細胞的適宜濃度和作用時間;正式實驗在適宜濃度和作用時間下收集細胞培養(yǎng)上清，利用一系列試劑盒檢測相關(guān)指標并做統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果
　　1、無菌灌洗提取腹腔細胞，貼壁純化培養(yǎng)，經(jīng)臺盼藍染色鑒定細胞存活率＞99％，瑞氏-姬姆薩染色鑒定巨噬細胞純度＞98％。
　　2、10-8M的低劑量納曲酮處理組96h培

5、養(yǎng)上清中H2O2的含量與空白對照組比較顯著升高(P＜0.01)。
　　3、10-8M的低劑量納曲酮處理組96h培養(yǎng)上清中NO的含量與空白對照組比較顯著升高(P＜0.01)。
　　4、10-8M的低劑量納曲酮處理組96h培養(yǎng)上清中TNF-α的含量與空白對照組比較顯著升高(P＜0.01)。
　　5、10-8M的低劑量納曲酮處理組96h培養(yǎng)上清中IL-12p70的含量與空白對照組比較顯著升高(P＜0.01)。
　　結(jié)論