巨噬細胞ly6Chigh向ly6Clow亞群轉變在肝損傷修復中的調控作用與機制研究.pdf

1、各種致病因素導致的肝損傷修復是一個多細胞參與的炎癥反應過程。體現(xiàn)在肝臟實質細胞變性、凋亡和壞死，和肝非實質細胞活化。長期慢性損傷引起肝臟膠原纖維沉積導致肝纖維化-肝硬化形成，而急性大量肝細胞損傷壞死則導致急性肝衰竭。肝硬化和肝衰竭都是臨床上常見而且嚴重威脅人類健康的疾病。巨噬細胞是固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在肝損傷修復過程中，發(fā)揮著雙重調控作用。研究表明，對肝臟巨噬細胞的有效干預可以影響肝損傷修復過程。因此，針對于肝損傷中巨噬細胞的作

2、用和功能的研究可能為治療各種肝臟疾病提供新靶點。
　　肝臟巨噬細胞根據其起源和功能可以分為不同亞群，它們在肝損傷修復中發(fā)揮不同的功能。受到損傷因素刺激后，肝臟定居型巨噬細胞凋亡壞死，骨髓來源巨噬細胞向肝臟浸潤。后者表現(xiàn)很強的功能異質性，在肝損傷的不同階段，可以分為ly6Chigh（ly6Chi）和ly6Clow（ly6Clo）兩個不同功能狀態(tài)的亞群，ly6Chi巨噬細胞表現(xiàn)為促炎促損傷的作用，而ly6Clo巨噬細胞則表現(xiàn)為促纖維降

3、解和促修復作用，因此肝臟中l(wèi)yChi/ly6Clo比例可以作為評價肝臟巨噬細胞整體功能的重要指標。研究表明，ly6Clo可能是由ly6Chi細胞轉變而來的，但調控機制仍有待深入研究。因此，研究肝損傷修復中巨噬細胞ly6Chi向ly6Clo亞群轉變的作用和分子機制，對靶向不同巨噬細胞亞群進行肝病治療具有重要意義。
　　我們之前的研究表明，回輸M1型巨噬細胞可以顯著地減輕小鼠肝臟纖維化，與肝內巨噬細胞數量增加和肝內基質金屬蛋白酶表達上

4、調相關。然而，M1回輸減輕肝纖維化是否與肝內巨噬細胞ly6Chi向ly6Clo亞群轉變相關，其可能的機制是什么，仍需要進一步的研究。
　　Notch信號在進化上高度保守，參與多種細胞命運選擇，在髓系細胞的發(fā)育、分化和功能調節(jié)上均發(fā)揮著重要調控作用。近期大量研究和我們的前期工作均表明，活化的巨噬細胞表達Notch信號途徑的多種分子，并且Notch信號可以參與巨噬細胞活化模式的調控。此外，Notch信號還可以通過CYLD-NFκB信號

5、參與巨噬細胞激活和功能的調控進而影響肝纖維化進程。那么Notch信號是否參與肝臟巨噬細胞ly6Chi向ly6Clo亞群轉變，是否可作為靶向肝臟巨噬細胞亞群治療肝纖維化的靶點，是亟待解決的問題。
　　因此，針對上述問題，開展了以下研究：
　　1.建立不同極化類型巨噬細胞回輸治療四氯化碳誘導的肝纖維化小鼠模型，利用TUNEL和免疫熒光等方法研究細胞回輸對纖維化肝臟星形細胞凋亡的誘導作用；
　　2.FACS分析肝臟非實質細胞

6、，檢測不同極化類型巨噬細胞回輸后對肝臟免疫細胞亞群的影響；
　　3.免疫磁珠分選技術獲得回輸后肝纖維化小鼠肝臟巨噬細胞，實時定量PCR方法檢測肝纖維化相關指標的變化；
　　4.免疫組化和生化檢測，觀察細胞回輸后肝臟細胞增殖和肝功能變化；
　　5.利用CCR2敲除小鼠和氯膦酸鹽脂質體清除實驗，研究M1型細胞回輸調控肝臟微環(huán)境不同來源巨噬細胞的作用。
　　6.在髓系RBP-J敲除小鼠上建立肝纖維化模型，F(xiàn)ACS檢測肝

7、臟髓系細胞亞群的變化；
　　7.在野生小鼠上建立肝切后再生模型，利用免疫染色、FACS等研究肝再生過程中巨噬細胞亞群的變化；
　　8.在髓系RBP-J敲除小鼠上建立肝切后再生模型，利用免疫組化染色、FACS等研究髓系Notch信號阻斷對肝再生的影響。
　　結果：
　　1.回輸M1型巨噬細胞促進肝臟NK細胞數目增多和活性增強，促進肝臟TRAIL分子的表達，誘導HSC凋亡，進而減少肝臟膠原產生；
　　2.促進自

8、體巨噬細胞向纖維化肝臟募集，并促進肝臟巨噬細胞由ly6Chi向ly6Clo亞群轉變，使得促纖維消融巨噬細胞亞群數量增多，增加肝臟膠原降解；
　　3.通過促進纖維化小鼠肝細胞增殖，促進肝臟損傷修復，進而緩解纖維化；
　　4.回輸的M1型巨噬細胞維持其M1表型，但數量逐漸減少，提示細胞回輸對微環(huán)境的改變主要發(fā)生于回輸早期；
　　5.在肝纖維化模型中，發(fā)現(xiàn)髓系細胞Notch信號阻斷促進巨噬細胞由ly6Chi向ly6Clo亞群

9、轉變，可能是減輕肝臟纖維化的細胞學機制；
　　6.在肝切除再生中，伴隨著巨噬細胞亞群的變化，發(fā)現(xiàn)巨噬細胞由ly6Chi向ly6Clo亞群轉變可能參與肝再生的調控。進一步利用轉基因小鼠肝再生模型發(fā)現(xiàn)，髓系細胞Notch信號阻斷促進巨噬細胞ly6Chi向ly6Clo亞群轉變，可能參與肝再生過程中血管內皮細胞增殖的調控。
　　綜上所述，ly6Clo巨噬細胞在肝損傷再生修復中發(fā)揮重要作用，髓系細胞Notch信號缺失可能促進ly6Ch