宮內(nèi)膜干細(xì)胞的成肝分化及其對肝損傷修復(fù)作用的研究.pdf

1、本研究目的為探討宮內(nèi)膜干細(xì)胞的體外成肝誘導(dǎo)分化及其在肝臟損傷中發(fā)揮的修復(fù)作用。首先，我們從招募的志愿者經(jīng)血中分離出單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行體外傳代培養(yǎng)并對獲得的細(xì)胞進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞鑒定。宮內(nèi)膜干細(xì)胞不具有致瘤性，可以呈單層貼壁生長，可以24小時(shí)倍增一次，為典型的棒狀或長梭狀的成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)分析這類細(xì)胞均表達(dá)CD44，CD73，CD90,和CD29，而不表達(dá)CD117，CD34，CD45，和HLA-DR。宮內(nèi)膜干細(xì)胞在體外可以被誘導(dǎo)分

2、化為成骨細(xì)胞和成脂細(xì)胞。
　　 其次，我們研究了宮內(nèi)膜干細(xì)胞的體外成肝誘導(dǎo)分化能力。宮內(nèi)膜干細(xì)胞在與HGF、FGF4、OSM以及DEX等共培養(yǎng)后，逐漸向上皮細(xì)胞樣細(xì)胞形態(tài)變化。誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞能夠表達(dá)ALB和AFP蛋白，以及基因ALB、AFP、CK18、CK19、CYP1A1和CYP3A4等。表達(dá)譜芯片分析可見分化后的細(xì)胞能表達(dá)33個(gè)肝臟相關(guān)基因，這些基因在原代肝臟細(xì)胞中表達(dá)，而宮內(nèi)膜干細(xì)胞中則不表達(dá)。另外，誘導(dǎo)分化后細(xì)胞功能驗(yàn)

3、證顯示，其具有糖原合成、ICG排泌和尿素合成功能等。這些數(shù)據(jù)可以初步證實(shí)，所誘導(dǎo)的細(xì)胞是具有肝細(xì)胞表型且能發(fā)揮部分肝臟細(xì)胞功能的較成熟的細(xì)胞。
　　 最后，為了驗(yàn)證移植細(xì)胞能否參與肝損傷修復(fù)過程，小鼠肝臟部分切除后，分別移植宮內(nèi)膜干細(xì)胞和誘導(dǎo)分化后細(xì)胞，移植后10天，移植分化組小鼠肝功能較移植宮內(nèi)膜干細(xì)胞組恢復(fù)明顯，具有顯著性差異。移植8周后，在小鼠肝臟中可以檢測到移植細(xì)胞的存在，并且移植宮內(nèi)膜干細(xì)胞在受體肝臟內(nèi)發(fā)生分化。Fah