骨髓來(lái)源肝干細(xì)胞成瘤性的研究.pdf

1、近來(lái)國(guó)內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)肝臟受到嚴(yán)重或慢性損害時(shí)，某些骨髓干細(xì)胞被招募到肝臟中，分化成為肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞而參與肝再生，這些干細(xì)胞被稱(chēng)為"骨髓來(lái)源肝干細(xì)胞"。通過(guò)動(dòng)員自身或移植外來(lái)的骨髓來(lái)源肝干細(xì)胞來(lái)促進(jìn)肝再生，在某些終末期肝病和先天性肝代謝性疾病中可能具有治療價(jià)值。但是，肝干細(xì)胞也可能發(fā)展成為肝癌。我們假設(shè)骨髓來(lái)源肝干細(xì)胞是肝癌的細(xì)胞來(lái)源之一，在致癌因素的作用下，招募到肝臟中的骨髓來(lái)源肝干細(xì)胞過(guò)度增生、突變率增加；肝臟細(xì)胞外基質(zhì)成分的改

2、變和結(jié)構(gòu)的破壞導(dǎo)致干細(xì)胞分化過(guò)程受阻而癌變。本實(shí)驗(yàn)首先用含5％淤膽血清的培養(yǎng)基誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成肝干細(xì)胞，然后將這些骨髓來(lái)源肝干細(xì)胞接種到裸鼠體內(nèi)，以驗(yàn)證其是否具有成瘤性。本研究將為肝干細(xì)胞在肝臟疾病中的安全應(yīng)用和了解肝癌的細(xì)胞來(lái)源提供科學(xué)依據(jù)。 目的：探討用含5％淤膽血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)的大鼠骨髓來(lái)源性肝干細(xì)胞(rat bone marrov-derived liyer stem cells，rBDLSCs)是否具有成瘤性。

3、 方法：無(wú)菌結(jié)扎大鼠膽總管建立淤膽動(dòng)物模型，10天后取其血清并測(cè)其中總膽紅素濃度。用含5％該血清的培養(yǎng)基誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells，rBMSCs)向肝干細(xì)胞(1iver stem cells，LSCs)方向分化。誘導(dǎo)過(guò)程中在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的變化；用免疫熒光法鑒定細(xì)胞角質(zhì)蛋白18(cytokeratin 18，CKl8)、甲胎蛋白(alpha fet

4、oprotein，AFP)和白蛋白(Albumin，ALB)在這些細(xì)胞中的表達(dá)；用糖原PAS染色法了解細(xì)胞內(nèi)糖原貯存情況；用二乙酰-肟法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中的尿素氮濃度。將誘導(dǎo)成的rBDLSCs接種子裸鼠皮下，移植一個(gè)月后觀察局部有無(wú)腫物形成并取接種部位的局部組織進(jìn)行化學(xué)染色。 結(jié)果：結(jié)扎膽總管10天后取得的大鼠血清總膽紅素濃度為113.6±27.4mmol/L。用含5％淤膽血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，4天后出現(xiàn)細(xì)胞集落，