環(huán)棘鞭蛇尾(Ophiomastix annulosa)皂苷的制備及其生物活性研究.pdf

1、本論文以環(huán)棘鞭蛇尾(Ophiomastix annulosa)作為實(shí)驗(yàn)材料,全面分析了煙臺(tái)崆峒島海域的環(huán)棘鞭蛇尾(整體)的營(yíng)養(yǎng)成分,研究了環(huán)棘鞭蛇尾皂苷的最佳提取工藝,測(cè)定了環(huán)棘鞭蛇尾皂苷的理化性質(zhì),對(duì)環(huán)棘鞭蛇尾皂苷進(jìn)行了分離純化,并且對(duì)其抗氧化活性、抑菌活性、溶血活性和抗腫瘤活性進(jìn)行了研究。
　　營(yíng)養(yǎng)成分分析結(jié)果:水分含量為2.55％,灰分含量為45%,蛋白質(zhì)含量為19.04%,總糖含量為1.72%,粗脂肪含量為2.20%,其中

2、多不飽和脂肪酸含量豐富,二十碳五烯酸( EPA)和花生四烯酸(AA)的含量較高,占總脂肪酸的17.87%。人體必需氨基酸占氨基酸總量的25.39%,無(wú)機(jī)元素中Ca含量最高。因此,環(huán)棘鞭蛇尾(整體)營(yíng)養(yǎng)成分豐富,具有良好的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。
　　采用單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)合正交試驗(yàn)對(duì)環(huán)棘鞭蛇尾皂苷的提取工藝進(jìn)行研究,結(jié)果表明,提取環(huán)棘鞭蛇尾皂苷的最佳條件為:85%的乙醇溶液浸提,提取溫度為55℃,提取料液比為1:20,重復(fù)提取3次,并且驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的

3、結(jié)果與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基本一致。
　　采用溶劑浸提法得到環(huán)棘鞭蛇尾粗皂苷,然后依次用水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂 AB-8分離純化除去多糖和無(wú)機(jī)鹽,收集各洗脫部分。80%的乙醇洗脫組分進(jìn)行硅膠柱層析,經(jīng) TLC( thin layer chromatography)點(diǎn)板得到單一組分。
　　通過(guò)物理化學(xué)方法對(duì)環(huán)棘鞭蛇尾皂苷進(jìn)行鑒定,表明環(huán)棘鞭蛇尾皂苷是甾體皂苷;與標(biāo)準(zhǔn)皂苷進(jìn)行比較,在200-800 n

4、m波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描,得到在216 nm處有最大吸收峰,在400-4000 cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行紅外掃描,結(jié)果說(shuō)明環(huán)棘鞭蛇尾皂苷是25R異螺甾烷醇型。
　　溶血活性實(shí)驗(yàn)表明,環(huán)棘鞭蛇尾皂苷具有溶血活性。這種活性在消除血栓、預(yù)防心血管疾病等方面有著積極的意義,具有研究?jī)r(jià)值和開(kāi)發(fā)前景。
　　采用濾紙片法測(cè)定結(jié)果表明環(huán)棘鞭蛇尾皂苷對(duì)供試菌均有一定的抑制作用,其中大腸桿菌(Escherichia coli)表現(xiàn)為最敏感,金黃色葡萄

5、球菌(Staphyloccocus aureus Rosenbach)表現(xiàn)為中度敏感,而啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Hansen)、黃曲霉(Aspergillus flavus)表現(xiàn)為低度敏感。環(huán)棘鞭蛇尾皂苷對(duì)四種供試菌的最低抑菌濃度(MIC)依次為:0.5mg/mL、1.0 mg/mL、4.0 mg/mL和2.0mg/mL。
　　采用MTT法測(cè)定環(huán)棘鞭蛇尾皂苷的抗腫瘤活性。結(jié)果表明,環(huán)棘鞭蛇尾皂

6、苷對(duì)腫瘤細(xì)胞HCT-116、MCF-7、LnCAP、HCT-15具有顯著的抑制作用,對(duì)RM-1、Acan有抑制作用,但是效果不顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,HCT-116、MCF-7、LnCAP、HCT-15四種腫瘤細(xì)胞對(duì)皂苷樣品表現(xiàn)出了很強(qiáng)的敏感性。由此說(shuō)明,篩選出環(huán)棘鞭蛇尾皂苷對(duì)四種腫瘤細(xì)胞HCT-116、MCF-7、LnCAP、HCT-15具有抗腫瘤作用,為動(dòng)物皂苷的抗腫瘤研究提供了理論基礎(chǔ)。
　　環(huán)棘鞭蛇尾皂苷的抗氧化活性實(shí)驗(yàn)主要包