IFN-γ調(diào)控HMGB1胞外分泌及血管平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化的作用機制.pdf

1、目的：探討IFN-γ調(diào)控大鼠血管平滑肌細胞HMGB1的胞外分泌和血管平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化的作用和機制。
　　方法：取雄性SD大鼠胸主動脈，組織貼塊法體外培養(yǎng)大鼠原代 VSMCs，予以IFN-γ處理，采用qRT-PCR和免疫印跡法（WB）檢測平滑肌細胞SIRT1的表達、HMGB1的表達以及細胞漿和細胞核HMGB1的蛋白水平，用ELISA檢測HMGB1培養(yǎng)基上清液中的含量，用免疫細胞熒光檢測HMGB1在細胞漿和細胞核的分布情況。為了進一

2、步探討SIRT1對IFN-γ誘導HMGB1的胞漿移位和釋放的影響，分別用SIRT的選擇性抑制劑EX-527和激活劑Resveratrol預處理SMCs，并用WB檢測細胞質(zhì)和細胞核內(nèi) HMGB1的蛋白量，ELISA法檢測培養(yǎng)基上清液中HMGB1蛋白濃度的變化。最后，觀察IFN-γ刺激VSMCs后，其分化標志物SM22α和調(diào)寧蛋白（Calponin）的變化，同時探討HMGB1中和性抗體對IFN-γ誘導SMCs表型轉(zhuǎn)化的影響。
　　結(jié)果

3、：IFN-γ可誘導VSMCs主動分泌HMGB1蛋白，卻不改變細胞內(nèi)HMGB1蛋白的總體含量。進一步實驗顯示，IFN-γ通過調(diào)節(jié)平滑肌細胞中HMGB1蛋白的胞漿移位，進而影響其胞外分泌。同時，IFN-γ下調(diào)平滑肌細胞中SIRT1基因的mRNA和蛋白表達。而SIRT1選擇性抑制劑EX-527明顯增強IFN-γ誘導HMGB1胞漿移位和分泌，而SIRT1激活劑Resveratrol卻有相反的作用。IFN-γ顯著降低SMCs中SM22α和calp