髓系特異性CXCR4敲除影響小鼠下肢缺血恢復(fù)的研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、外周血管病嚴(yán)重危害人類(lèi)健康,而如何解決缺血發(fā)生后組織修復(fù)和功能恢復(fù)是目前的研究熱點(diǎn)。炎癥是缺血后組織修復(fù)以及血管新生不可或缺的條件,適度的炎癥反應(yīng)有助于清除壞死組織,促進(jìn)血管新生,而過(guò)度的炎癥反應(yīng)可加重組織損傷,促進(jìn)缺血病灶進(jìn)一步惡化。趨化因子在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的過(guò)程中起到至關(guān)重要的作用。已證實(shí)多種趨化因子及其受體參與調(diào)控缺血后炎癥細(xì)胞的募集,其中包括基質(zhì)衍生因子(SDF-1)及其配體CXCR4。并且已有初步研究顯示SDF-1/CXCR4軸

2、參與調(diào)控缺血后炎癥反應(yīng)以及血管新生。然而,SDF-1/CXCR4軸在缺血相關(guān)炎癥及修復(fù)中的作用仍不明了。
  目的:
  研究CXCR4如何調(diào)控中性粒細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞在缺血下肢處的募集,并探討CXCR4在炎癥細(xì)胞的表達(dá)對(duì)缺血性炎癥反應(yīng)以及修復(fù)的影響。
  方法:
  我們通過(guò)Cre-LoxP基因敲除技術(shù)得到了髓系細(xì)胞(主要是中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)特異性CXCR4敲除的小鼠(MKO)。我們檢測(cè)了MKO小鼠體重,脾臟

3、大小,外周血象等指標(biāo),并檢測(cè)了中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞表面CXCR4的表達(dá)。通過(guò)結(jié)扎股動(dòng)脈我們構(gòu)建了小鼠下肢缺血模型,通過(guò)激光多普勒觀(guān)察術(shù)后小鼠下肢血流恢復(fù)的情況并觀(guān)察足趾壞死情況。通過(guò)免疫熒光染色我們觀(guān)察比較MKO小鼠和對(duì)照小鼠缺血組織血管新生的情況,并通過(guò)組織化學(xué)染色和流式細(xì)胞術(shù)觀(guān)察炎癥細(xì)胞在缺血病灶的浸潤(rùn)情況,并通過(guò)PCR檢測(cè)缺血下肢炎癥因子表達(dá)情況。在體外,我們觀(guān)察SDF-1/CXCR4軸對(duì)中性粒細(xì)胞,巨噬細(xì)胞遷移能力的影響,以及觀(guān)

4、察CXCR4敲除對(duì)上述兩種細(xì)胞促炎能力的影響。為進(jìn)一步明確CXCR4對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響,我們分別通過(guò)脂多糖(LPS)和干擾素-γ以及白介素-4分別誘導(dǎo)MKO或WT來(lái)源的骨髓巨噬細(xì)胞向M1型和M2型極化,通過(guò)qPCR檢測(cè)相關(guān)極化標(biāo)志物的表達(dá)水平。
  結(jié)果:
  我們發(fā)現(xiàn)MKO小鼠中性粒細(xì)胞骨髓中失歸巢,在外周血數(shù)量明顯增加。對(duì)照組小鼠較MKO小鼠下肢缺血恢復(fù)明顯變差,足趾壞死程度更為嚴(yán)重,然而并不影響其遠(yuǎn)期預(yù)后。提示髓系細(xì)

5、胞CXCR4表達(dá)對(duì)于下肢缺血血流恢復(fù)的重要作用。通過(guò)免疫熒光染色和流式細(xì)胞術(shù)我們發(fā)現(xiàn)較對(duì)照小鼠相比,MKO小鼠術(shù)后早期缺血肌肉CD11b陽(yáng)性細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量明顯增加,隨后迅速下降,同時(shí)炎癥因子的表達(dá)也有所增加。然而巨噬細(xì)胞數(shù)量并無(wú)明顯改變。在體外試驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)CXCR4敲除對(duì)于中性粒細(xì)胞炎癥因子釋放能力并無(wú)影響,明顯增強(qiáng)了巨噬細(xì)胞由M0向M1極化的能力兒不改變其向M2極化的能力。同時(shí)CXCR4敲除并不影響了中性粒細(xì)胞對(duì)于SDF-1的

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