角質(zhì)細(xì)胞特異性Pten基因敲除導(dǎo)致小鼠毛囊干細(xì)胞動員加快.pdf

1、中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文角質(zhì)細(xì)胞特異性Pten基因敲除導(dǎo)致小鼠毛囊干細(xì)胞動員加快姓名：王麗娟申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：楊曉20100605中文摘要細(xì)胞會從皮膚表面脫落，具有較強(qiáng)增殖能力的臨時(shí)增殖細(xì)胞其摻入核內(nèi)的BrdU會因?yàn)榉磸?fù)增殖而被逐漸稀釋，最終呈現(xiàn)Brdu陽性的細(xì)胞則是細(xì)胞周期緩慢的毛囊干細(xì)胞。注射60天后檢測Brdu標(biāo)記滯留細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)在對照和P絕，l基因敲除小鼠的毛囊隆突都能存在很多Brdu標(biāo)記滯留

2、細(xì)胞。而注射77天后再次檢測Brdu標(biāo)記滯留細(xì)胞，結(jié)果顯示在對照小鼠的毛囊隆突存在BrdU標(biāo)記滯留細(xì)胞，而P地，l基因敲除小鼠的毛囊和整個表皮的細(xì)胞中都基本檢測不到BrdU標(biāo)記滯留細(xì)胞。說明P紀(jì)，l基因敲除會促進(jìn)毛囊干細(xì)胞動員。利用CD34和Ki67抗體熒光雙標(biāo)記檢測，發(fā)現(xiàn)對照小鼠毛囊中表達(dá)CD34的細(xì)胞基本不表達(dá)Ki67，而P把以基因敲除小鼠毛囊CD34陽性的細(xì)胞其中一些是Ki67陽性的。這就直接證明了P砌基因敲除后小鼠毛囊干細(xì)胞動員

3、確實(shí)加快。我們利用干細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)在體外進(jìn)一步證明了R翻基因敲除小鼠的毛囊干細(xì)胞動員加快。將尸紀(jì)以基因敲除小鼠和對照小鼠皮膚中原代分離的相同數(shù)目的角質(zhì)細(xì)胞在有小鼠胚胎成纖維細(xì)胞做滋養(yǎng)層的體系中培養(yǎng)，對克隆形成的速度和大小進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析。發(fā)現(xiàn)來自R繃基因敲除小鼠的細(xì)胞克隆形成速度快，但小克隆較多。其中細(xì)胞數(shù)在32200的小克隆約占全部克隆的63％，而對照小鼠是4l％。細(xì)胞數(shù)大于1000的大克隆只占全部克隆的137％，而對照小鼠是18％。