C-EBPβ介導(dǎo)β-catenin信號(hào)分子在子癇前期氧化應(yīng)激發(fā)病機(jī)制中的研究.pdf

1、目的：檢測(cè)正常足月妊娠及子癇前期孕婦胎盤組織C/EBPβ和β-catenin蛋白的定位及表達(dá)；采用缺氧/復(fù)氧模型體外模擬胎盤氧化應(yīng)激損傷，研究C/EBPβ和β-catenin在調(diào)控人滋養(yǎng)細(xì)胞遷移和侵襲中的作用；探討C/EBPβ是否介導(dǎo)β-catenin信號(hào)分子在子癇前期氧化應(yīng)激發(fā)病機(jī)制中的作用，為后者的早期診斷和治療提供借鑒。
　　方法：（1）選擇2013年3月至2014年3月在我校附一院產(chǎn)科住院分娩的22例子癇前期孕婦為研究對(duì)象

2、，另以20例正常足月妊娠孕婦設(shè)對(duì)照組，收集兩組孕婦胎盤組織。免疫組化SP法定位各組胎盤組織中C/EBPβ和β-catenin蛋白，蛋白印跡法（Western Blotting，WB）檢測(cè)各組胎盤組織中C/EBPβ和β-catenin蛋白的表達(dá)水平。（2）通過shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染質(zhì)粒干擾早孕期絨毛外植體和HTR8/SVneo細(xì)胞株的C/EBPβ基因表達(dá)，通過氯化鋰激活β-catenin信號(hào)分子；同時(shí)，對(duì)早孕期絨毛組織和HTR8/SVneo

3、細(xì)胞株進(jìn)行缺氧/復(fù)氧培養(yǎng)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)阻斷C/EBPβ和激活β-catenin對(duì)HTR8/SVneo細(xì)胞侵襲能力的影響。絨毛外植體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)評(píng)估阻斷 C/EBPβ和激活β-catenin對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞外生性遷移的影響。（3）WB法檢測(cè)各組HTR8/SVneo細(xì)胞中 C/EBPβ、β-catenin、MMPs和 TIMPs蛋白的表達(dá)情況，觀察C/EBPβ→β-catenin→MMPs、TIMPs在氧化應(yīng)激中的變化；同時(shí)，

4、檢測(cè)各組 HTR8/SVneo細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激指標(biāo) ROS蓄積量；進(jìn)一步明確C/EBPβ介導(dǎo)β-catenin信號(hào)分子在子癇前期氧化應(yīng)激發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　結(jié)果：（1）正常足月妊娠組及子癇前期組胎盤組織中均有C/EBPβ和β-catenin蛋白表達(dá)。C/EBPβ主要定位于合體滋養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核。β-catenin主要定位于合體滋養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞核，在細(xì)胞質(zhì)中亦有少量表達(dá)。子癇前期組胎盤組織中 C/EBPβ、β-catenin蛋白表達(dá)水平

5、分別為(0.47±0.01)、（0.27±0.05），分別與對(duì)照組（0.25±0.02）、（0.55±0.07）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。（2）缺氧/復(fù)氧可導(dǎo)致絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲遷移力下降，而敲減C/EBPβ表達(dá)或激活β-catenin信號(hào)分子可以改善受損的絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲遷移能力。（3）缺氧/復(fù)氧可導(dǎo)致HTR8/SVneo細(xì)胞中C/EBPβ表達(dá)上調(diào)，降低β-catenin表達(dá)及抑制MMP-2/9、活化TIMP-1/2；

6、敲減C/EBPβ表達(dá)，可上調(diào)β-catenin表達(dá)，同時(shí)活化 MMP-2/9和抑制 TIMP-1/2；激活β-catenin信號(hào)分子，對(duì)C/EBPβ無(wú)影響，但仍可活化 MMP-2/9和抑制 TIMP-1/2。（4）缺氧/復(fù)氧可增加細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激損傷，敲減C/EBPβ的表達(dá)或β-catenin激活可以有效抑制ROS的蓄積。
　　結(jié)論：在子癇前期胎盤組織中，C/EBPβ表達(dá)水平升高可通過調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路而影響MM