阿霉素氧化應激反應介導的心臟毒性作用及其機制研究.pdf

1、目的:闡明阿霉素(Doxorubicin，DOX)的心臟毒性機制，為尋找有效防治DOX心臟毒性的藥物提供重要的理論和實驗依據。
　　方法:采用6～8周齡雄性健康SD大鼠作為實驗模型，共24只，隨機分為四組，每組6只:給藥5次組(DOX5)、給藥10次組(DOX10)、5次生理鹽水對照組(NS5)、10次生理鹽水對照組(NS10)。 DOX10組動物給予DOX(2.0mg/kg， i.p.)，NS10組動物給予等體積的生理鹽水(No

2、rmal Saline，NS)，每周兩次給藥，共給藥10次。5次組(DOX5)給予五次DOX5次后停止給藥，生理鹽水對照組(NS5)給予NS后停止給藥。每次給藥結束后，需經過14天的清除期，以頸椎脫臼的方法處死大鼠，清理大鼠迅速剖胸摘取心臟。以眼科剪剪取小鼠心肌，獲取心肌組織，檢測過氧化氫酶(CAT)活性，檢測超氧化物歧化酶(SOD)活性，檢測脂質過氧化產物丙二醛(MDA)含量，以此三項標準觀察心臟損害程度。Westem blot法檢測

3、心肌蛋白凋亡相關信號因子Caspase-3表達，Bcl-2，Bax的蛋白表達，計算Bcl-2/Bax了解細胞凋亡情況。
　　結果:
　　1、DOX實驗組均較對照組出現(xiàn)部分區(qū)域心肌纖維橫紋不齊或消失，核偏移甚至裂解消失，肌纖維水腫，間隙增寬，排列紊亂，有炎性因子滲出，且DOX10組較DOX5組表現(xiàn)更為明顯。
　　2、過氧化氫酶(CAT)檢測
　　各組過氧化氫酶活性分別為:NS5組（37.27±1.39）U/mg蛋白

4、，DOX5組（29.00±1.14）U/mg蛋白，NS10組（36.31±1.05）U/mg蛋白，DOX10組（24.41±1.13）U/mg蛋白。
　　結果顯示，DOX組CAT含量明顯低于NS組，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。DOX10實驗組CAT含量低于DOX5實驗組，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3、超氧化物歧化酶(SOD)檢測
　　各組超氧化物歧化酶(SOD)檢測結果分別為:NS5組（28.50±

5、0.54）U/mg蛋白，DOX5組（23.40±0.59）U/mg蛋白，NS10組（27.80±0.25）U/mg蛋白，DOX10組（19.20±0.47）U/mg蛋白。
　　DOX組SOD含量低于NS組，差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。DOX10實驗組SOD含量低于DOX5實驗組，差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　4、丙二醛(MDA)檢測結果
　　各組丙二醛(MDA)檢測結果分別為:NS5組（2.86±0.2

6、1）nmol/mg蛋白，DOX5組（6.93±0.39）nmol/mg蛋白，NS10組（3.04±0.31）nmol/mg蛋白，DOX10組（12.00±0.14）nmol/mg蛋白。
　　DOX組MDA含量高于NS組，差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。DOX10實驗組MDA含量高于DOX5實驗組，差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　5、Western blot測蛋白凋亡相關信號因子Caspase-3，bcl-2，bax

7、的蛋白表達
　　結果
　　5.1 Caspase-3表達檢測結果
　　各組Caspase-3表達檢測結果分別為:NS5組14.34±1.59，DOX5組24.21±1.30，NS10組13.39±3.13，DOX10組34.18±1.14。
　　DOX組Caspase-3表達高于NS組，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。DOX10實驗組Caspase-3表達高于DOX5實驗組，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。<

8、br>　　5.2 Bcl/Bax比值
　　各組Bcl-2表達檢測結果分別為:NS5組24.34±2.80，DOX5組17.42±1.19，NS10組26.46±1.34，DOX10組15.78±2.48。
　　各組Bax表達檢測結果分別為:NS5組15.38±1.15，DOX5組24.04±1.62，NS10組14.94±2.47，DOX10組28.97±1.73。
　　各組Bcl-2/Bax比值結果分別為:NS5組1

9、.58±2.43，DOX5組0.72±0.73，NS10組1.77±0.54，DOX1O組0.54±1.43。
　　DOX5實驗組Bcl-2/Bax比值低于NS5對照組，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。DOX10實驗組Bcl-2/Bax比值低于NS10對照組，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 DOX10實驗組Bcl-2/Bax比值低于DOX5實驗組，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論:
　　1、DOX給藥