氧化應(yīng)激在羅哌卡因所致大鼠脊髓神經(jīng)毒性中的作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：觀察大鼠鞘內(nèi)間斷注射1％的羅哌卡因12h后，第1天，第3天，第5天，第7天，第14天，第28天脊髓氧化應(yīng)激，神經(jīng)毒性及ERK1表達(dá)的情況，以及應(yīng)用抗氧化劑TEMPOL后的變化，以探討氧化應(yīng)激損傷對(duì)羅哌卡因的脊髓神經(jīng)毒性的影響及其機(jī)制。
　　 方法：雄性SD大鼠144只采用腰段鞘內(nèi)置管法在蛛網(wǎng)膜下腔內(nèi)置入PE10導(dǎo)管至脊髓腰膨大，隨機(jī)分為4組：S組(假手術(shù)組)，N組(對(duì)照組)，R組(羅哌卡因組)，T組(TEMPOL組)。S組

2、只置管不給藥；N組(對(duì)照組)經(jīng)PE10導(dǎo)管注入生理鹽水0.12μL，/g，每間隔1.5h1次，共8次；R組(羅哌卡因組)注入1.0％羅哌卡因0.12μL/g，每間隔1.5 h1次，共8次；T組(TEMPOL組)先注入羅哌卡因，方法同R組，最后一次羅哌卡因注射完后4h，8h，12h，24h，48h，72h分別注入TEMPOL5μL(380 nmol)。各組均觀察1d、3d、5d、7d、14d、28d后取材。S組記為“S1組、S3組、S5組

3、、S7組、S14組、S28組”。N組記為“N1組、N3組、N5組、N7組、N14組、N28組”。R組記為“R1組、R3組、R5組、R7組、R14組、R28組”。T組記為“T1組、T3組、T5組、T7組、T14組、T28組”。(n=6)注藥前1天和羅哌卡因注射完成后1.5 h，第1天，第3天，第5天，第7天，第14天，第28天測(cè)定雙后肢熱刺激回縮閾值、機(jī)械刺激回縮閾值。處死大鼠，取脊髓腰膨大組織，HE染色觀察脊髓組織形態(tài)學(xué)改變，TUNEL

4、染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，免疫組化法測(cè)定ERK1的表達(dá)，MDA含量和SOD活性測(cè)定檢測(cè)ROS水平。
　　 結(jié)果：⑴1％羅哌卡因間斷鞘內(nèi)注射后1.5h大鼠出現(xiàn)雙后肢痛閾較N組和S組明顯上升，并于第1天達(dá)到最高值，此后痛域值逐漸下降，但仍高于N組和S組，直至第28天痛域恢復(fù)至N組水平(P<0.05)。與R組相比，T組在1-3天痛閾值明顯降低，此后各時(shí)間點(diǎn)痛域值均低于R組(P<0.05)，至第28天無(wú)明顯差異。⑵S組和N組HE染色脊髓未出現(xiàn)

5、明顯病理改變，R組在1-3天出現(xiàn)脊髓神經(jīng)元變性和凋亡，此后損傷持續(xù)發(fā)展凋亡細(xì)胞逐漸增多，甚至出現(xiàn)部分細(xì)胞壞死，直至14天病變減輕，凋亡細(xì)胞減少。與R組比較，T組早期正常神經(jīng)元數(shù)量較多，凋亡細(xì)胞較少，有個(gè)別細(xì)胞壞死，第14天大部分神經(jīng)細(xì)胞正常，僅可見(jiàn)少量凋亡細(xì)胞，第28天脊髓神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)基本正常。⑶與N組相比，R1，R3，R5組和T1，T3，T5組TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多，此后逐漸減少但明顯多于于N組(P<0.05)；與R組相比，T

6、3組明顯減少，此后T組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均少于R組(P<0.05)。⑷與N組相比，R1，R3組和T1，T3組ERK1表達(dá)明顯增高，逐漸降低，但仍明顯高于N組(P<0.05)，直至術(shù)后第28天恢復(fù)至N組水平(P>0.05)。與R相比，T3組ERK1表達(dá)明顯降低，此后T組的表達(dá)均少于R組(P<0.05)，直至第14天，與R組的表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05)。⑸與N組比較，R1，R3，R5組和T1，T3，T5，T7組MDA含量明顯增多，此后逐漸減少，

7、但R組仍明顯高于N組(P<0.05)。與R相比，T3組MDA含量明顯降低，此后各時(shí)間點(diǎn)的含量均少于R組(P<0.05)。與N組比較，R1，R3，R5組和T1，T3，T5，T7組SOD總活力增高，此后逐漸減少，但仍明顯高于N組(P<0.05)。與R相比，T3組SOD總活力明顯增高，此后各時(shí)間點(diǎn)的活力均高于R組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：①間斷鞘內(nèi)注射1％羅哌卡因12h后大鼠脊髓的ROS水平明顯升高，大鼠痛域值升高，脊髓神經(jīng)元發(fā)