犢牛睪丸支持細胞的分離培養(yǎng)及其對淋巴細胞的影響.pdf

1、本試驗采用不同方法對犢牛睪丸支持細胞進行體外分離培養(yǎng)，分析其最佳分離純化方法。通過凍存試驗，觀察支持細胞凍存后恢復情況。檢測并比較支持細胞及其條件培養(yǎng)液對犢牛PBMC及小鼠脾細胞轉化的影響。獲得如下結果： 1分別采用Ⅰ、Ⅳ型膠原酶與胰蛋白酶相結合對犢牛睪丸進行次第消化，證明采用1g/L的Ⅳ型膠原酶消化10 min、2.5 g/L的胰蛋白酶消化8 min的消化方法消化犢牛支持細胞所用的時間最短，得到的細胞數量較多，細胞活力在95％

2、以上。 2犢牛睪丸支持細胞在培養(yǎng)3 h～4 h后開始貼壁，5 h換液，能夠去除大部分精原細胞，24 h后，用20 mmol/L Tris-HCl緩沖液(pH 7.0)對細胞進行3 min～5 min的低滲處理，能夠去除殘存的精原細胞48 h后，細胞基本鋪成單層。分離得到的犢牛支持細胞經過液氮凍存21 d后，取出培養(yǎng)，細胞能夠正常生長。 3犢牛睪丸支持細胞在培養(yǎng)3 d～4 d，相鄰細胞有緊密連接，細胞融合成片，鋪成膜狀單層

3、，胞質中可見較多的顆粒狀物質或空泡。經過Feulgen染色后，可見細胞核內的衛(wèi)星核小體，SABC免疫組化染色可見支持細胞胞漿及胞膜呈黃染，為FasL陽性表達。 4犢牛睪丸支持細胞對淋巴細胞活性影響實驗證明，支持細胞可顯著抑制犢牛和小鼠淋巴細胞的轉化。同時證明，支持細胞可直接或通過旁分泌發(fā)揮上述作用。通過在兩種類型細胞間鋪瓊脂糖，建立了一種新的共培養(yǎng)方法。 通過本次試驗，建立了一種簡單、易行的犢牛Sertoli細胞分離培養(yǎng)