根癌農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo)的微紫青霉菌菌株GXCR遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立.pdf_第1頁(yè)
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1、從基因水平來(lái)研究絲狀真菌與重金屬間的相互作用具有重要的意義，近年來(lái)發(fā)展的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化(ATMT)與傳統(tǒng)的遺傳轉(zhuǎn)化方法相比較，ATMT具有高效、穩(wěn)定、高頻單拷貝隨機(jī)插入、適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，是目前研究絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化的主要手段之一。 基于本實(shí)驗(yàn)室工作曾分離得到一株高抗多種重金屬鹽并對(duì)苯菌靈敏感的微紫青霉菌(Penicllium janthinellum)菌株GXCR的良好基礎(chǔ)，研究將建立由根癌農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo)的G

2、XCR菌株的遺傳轉(zhuǎn)化體系，為從基因水平上研究該菌株對(duì)重金屬鹽抗性的可能機(jī)制提供基礎(chǔ)。 本研究在質(zhì)粒pGSA1252基礎(chǔ)上構(gòu)建了T-DNA區(qū)含有苯菌靈抗性基因(Benomyl resistance)的雙元載體pG-Bn，通過(guò)三親轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入到根癌農(nóng)桿菌LBA4404中，與稀釋至107個(gè)/ml的GXCR孢子共培養(yǎng)兩天后篩選得到具有苯菌靈抗性的轉(zhuǎn)化株367株，對(duì)隨機(jī)挑取的40株轉(zhuǎn)化株總DNA進(jìn)行PCR驗(yàn)證，有98％的轉(zhuǎn)化株均能擴(kuò)增出目的

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