益氣養(yǎng)陰清利濕熱方對(duì)IgA腎病大鼠腎臟的保護(hù)作用及其對(duì)緩激肽B1受體-B2受體的影響.pdf

1、目的：IgA腎病(IgAnephropathy, IgAN)是一種常見(jiàn)的原發(fā)性腎小球疾病,以腎臟免疫病理顯示 IgA為主的免疫復(fù)合物在腎小球系膜區(qū)為特征。主要臨床表現(xiàn)為血尿，可伴有不同程度的蛋白尿、高血壓和腎臟功能受損，是導(dǎo)致終末期腎臟病常見(jiàn)的原發(fā)性腎小球疾病，10％～20%的成年患者在10年內(nèi)進(jìn)展為終末期腎病。大量研究表明中醫(yī)藥在本病的治療中具有一定的優(yōu)勢(shì)。導(dǎo)師郭登洲教授根據(jù)“氣陰兩虛，兼有濕熱”的病機(jī)，擬以益氣養(yǎng)陰清熱利濕方，臨床上

2、取得良好療效。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究該方對(duì)IgAN大鼠腎臟的保護(hù)作用及其對(duì) B1受體、B2受體的影響，探尋其可能的作用機(jī)制。
　　方法：健康清潔級(jí)雄性SD大鼠40只，體重140～160g，在溫度20℃～24℃，相對(duì)濕度40%-60%的環(huán)境中，適應(yīng)性飼養(yǎng)7天，第7天末檢測(cè)尿蛋白陰性、潛血陰性者，依據(jù)體重將大鼠隨機(jī)分為4組，即正常組、模型組、中藥組和貝那普利組，每組各10只。參照湯穎[3]造模方法進(jìn)行模型復(fù)制：牛血清白蛋白用蒸餾水配制成100

3、g/L濃度，以劑量4ml/kg（400mg/Kg）給予灌胃，1次/隔日，一共持續(xù)42天；四氯化碳0.1ml+蓖麻油0.5ml皮下注射，1次/7天，一共持續(xù)63天；將脂多糖用氯化鈉溶液調(diào)配，濃度為0.25g/L，于第42、56天尾靜脈注射0.05mg（0.2ml）。正常組大鼠給予同等劑量的蒸餾水灌胃，1次/隔日，一共持續(xù)42天；皮下注射氯化鈉溶液0.6ml，1次/7天，一共持續(xù)63天；第42、56天尾靜脈注射氯化鈉溶液0.2ml。模型復(fù)制

4、成功后于第64天開(kāi)始分別給予各組相應(yīng)的藥物干預(yù)，即：中藥組給予益氣養(yǎng)陰清利濕熱中藥灌胃，貝那普利組給予鹽酸貝那普利灌胃。正常組、模型組均給予相應(yīng)劑量的蒸餾水灌胃，一共持續(xù)56天。于第1天以及第50、64、92、120天檢測(cè)各組大鼠的24小時(shí)尿蛋白定量（24 hours urinary total protein，24h-UTP）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死大鼠，留取腎臟標(biāo)本，行 HE、Masson、PAS、PASM染色，免疫熒光法檢測(cè)IgA免疫復(fù)

5、合物在大鼠腎臟的沉積情況，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）和免疫組化法檢測(cè)大鼠B1受體和B2受體的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、24小時(shí)尿蛋白定量的比較
　　1.1、同一時(shí)期各組大鼠24h-UTP的比較
　　模型復(fù)制第1天：正常組、貝那普利組、中藥組、模型組的24h-UTP均為陰性。
　　第50天，貝那普利組、中藥組、模型組的24h-UTP與正常組相比均明顯升高，且具有顯著差異（P＜0.05），貝那普

6、利組、中藥組、模型組的24h-UTP比較無(wú)顯著差異（P＞0.05）。
　　第64天，與正常組比較，貝那普利組、中藥組、模型組的24h-UTP均明顯升高，且具有顯著差異（P＜0.05），貝那普利組、中藥組、模型組的24h-UTP比較無(wú)顯著差異（P＞0.05）。
　　第92天，與正常組比較，貝那普利組、中藥組、模型組的24h-UTP均明顯升高，且具有顯著差異（P＜0.05）；與模型組比較，貝那普利組、中藥組的24h-UTP比均明

7、顯降低，且具有顯著差異（P＜0.05），貝那普利組、中藥組的24h-UTP相比無(wú)顯著差異（P＞0.05）。
　　第120天，與正常組比較，貝那普利組、中藥組、模型組的24h-UTP均明顯升高，具有顯著差異（P＜0.05）；與模型組比較，貝那普利組、中藥組的24h-UTP均明顯降低，且具有顯著差異（P＜0.05），貝那普利組、中藥組的24h-UTP相比無(wú)顯著差異（P＞0.05）。
　　1.2、同一組大鼠在不同時(shí)期的24h-UT

8、P的比較
　　正常組24h-UTP比較：造模開(kāi)始第1天、第50、64、92、120天均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。
　　貝那普利組24h-UTP比較：第50天較造模開(kāi)始第1天明顯升高，且具有顯著差異（P＜0.05）；第64天較第50天明顯升高，且具有顯著差異（P＜0.05）；第92、120天較第64天均明顯降低，且具有顯著差異（P＜0.05）；第120天較92天明顯降低，且具有顯著差異（P＜0.05）。
　　中藥組24

9、h-UTP比較：第50天較第1天明顯升高，且具有顯著差異（P＜0.05）；第64天較第50天明顯升高，且具有顯著差異（P＜0.05）；第92天、第120天較第64天均明顯降低，且具有顯著差異（P＜0.05）；第120天較第92天明顯降低，且具有顯著差異（P＜0.05）。
　　模型組24h-UTP比較：第50天較第1天明顯升高，且具有顯著差異(P＜0.05)；第64天較第50天明顯升高，且具有顯著差異(P＜0.05)；第64天、第9

10、2天、第120天相比較，無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　2、光鏡下腎臟病理學(xué)改變
　　正常組：可見(jiàn)腎小球結(jié)構(gòu)完整，腎小球系膜及基質(zhì)無(wú)明顯異常改變；模型組：可以見(jiàn)到系膜基質(zhì)增多以及系膜細(xì)胞增生；貝那普利組與中藥組雖有系膜基質(zhì)增多以及系膜細(xì)胞增生，但較模型組減輕。
　　3、 IgA免疫熒光在腎臟的表達(dá)情況
　　正常組腎小球系膜區(qū)無(wú)免疫復(fù)合物沉積；而模型組的腎小球系膜可見(jiàn)免疫復(fù)合物呈顆粒狀或團(tuán)塊狀沉積。貝那普利組與中

11、藥組：腎小球系膜可見(jiàn)不同程度的免疫復(fù)合物沉積，但較模型組程度輕。
　　4、 B1受體在腎臟的表達(dá)情況：
　　免疫組化：與正常組比較，中藥組、貝那普利組、模型組的表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05)；與模型組比較，中藥組、貝那普利組的表達(dá)減弱(P＜0.05)；中藥組、貝那普利組組間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　RT-PCR：與正常組比較，中藥組、貝那普利組、模型組的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05)；與模型組比較，中藥組、貝那普利組的

12、表達(dá)減弱(P＜0.05)；中藥組、貝那普利組組間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　5、 B2受體在腎臟的表達(dá)情況
　　免疫組化：與正常組比較，中藥組、貝那普利組、模型組的表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05)；與模型組比較，中藥組、貝那普利組的表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05)；中藥組、貝那普利組組間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　RT-PCR：與正常組比較，中藥組、貝那普利組、模型組的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05)；與模型組比較，中藥組、貝

13、那普利組的表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05)；中藥組、貝那普利組兩組間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、益氣養(yǎng)陰清利濕熱方可以降低IgA腎病大鼠的24小時(shí)尿蛋白定量。
　　2、益氣養(yǎng)陰清利濕熱中方可以下調(diào)緩激肽B1受體的表達(dá)，從而降低蛋白尿、保護(hù)腎臟。
　　3、益氣養(yǎng)陰清利濕熱中方可以上調(diào)緩激肽B2受體的表達(dá)，從而降低蛋白尿、保護(hù)腎臟。
　　4、益氣養(yǎng)陰清利濕熱方可以減輕 IgA腎病的腎臟病理學(xué)改變，