益氣養(yǎng)陰法對(duì)IgA腎病大鼠腎臟組織中腫瘤不死因子及α-平滑肌動(dòng)蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:IgA腎病(IgA nephropathy，IgAN)又稱Berger病。是腎臟免疫病理檢查中IgA或以IgA為主的免疫復(fù)合物在腎小球系膜區(qū)、毛細(xì)血管袢沉積的一類(lèi)原發(fā)性腎小球疾病。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)復(fù)制IgA腎病大鼠模型，并予相應(yīng)的益氣養(yǎng)陰中藥物進(jìn)行干預(yù)治療以研究益氣養(yǎng)陰法對(duì)IgA腎病的治療作用及可能作用機(jī)制，為臨床實(shí)驗(yàn)和治療提供理論依據(jù)及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:依據(jù)湯穎等的造模方法，對(duì)Sprague-Dauley(SD)大鼠進(jìn)行Ig

2、A腎病模型復(fù)制:150g左右的SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組，用牛血清白蛋白(Bovine serum albumin，BSA)灌胃八周，0.3ml蓖麻油+0.1ml四氯化碳(Carbom tetrachloride，CCl4)皮下注射九周，并在第7周末尾靜脈注射脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS);正常組分別予純凈水灌胃、生理鹽水皮下注射、尾靜脈注射。益氣養(yǎng)陰組大鼠益氣養(yǎng)陰中藥物進(jìn)行灌胃，貝那

3、普利組大鼠予貝那普利混懸液進(jìn)行灌胃，正常組、模型組予等量純凈水灌胃，持續(xù)8周。于模型復(fù)制前尿蛋白試紙測(cè)定尿蛋白、第4、7、10、14、18周末測(cè)定24小時(shí)尿蛋白定量、尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。第18周末斷頭取血，血清分離，檢測(cè)血清中血尿素氮(Bloodurea nitrogen，BUN)、血清肌酐(Serum creatinine，Scr)，留取腎臟組織，行HE、PAS、Masson、Jones銀染色光鏡檢查及免疫熒光檢查，免疫組化法測(cè)定模型大鼠腎

4、臟組織中α-平滑肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscleactin，α-SMA)、腫瘤壞死因子α(Tumour necrosis factor-α，TNF-α)的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1大鼠一般情況:
　　正常組:一般情況良好，毛色光亮，肌肉豐滿，精神正常，正常飲食、反應(yīng)敏捷
　　模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組:實(shí)驗(yàn)初情況同正常組，模型復(fù)制開(kāi)始后被毛雜亂，毛色逐漸無(wú)光，消瘦，反應(yīng)遲緩，尾靜脈注射脂多糖后，一

5、只老鼠當(dāng)即死亡（貝那普利組，原因不詳，考慮按壓老鼠力氣過(guò)大或注射器中進(jìn)入空氣），第一天死亡1只（模型組），第三天死亡1只（貝那普利組），三組老鼠均不欲飲食，另有2只（模型組、貝那普利組）第二天鼻眼部出現(xiàn)流血精神萎靡，一周后情況好轉(zhuǎn)。貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組治療后精神、毛色、飲食較模型組好轉(zhuǎn)。死亡老鼠剔除。
　　2同一時(shí)期不同組大鼠尿蛋白定量的比較:
　　模型復(fù)制前:正常組、模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠四組大鼠的尿蛋白定量

6、均為陰性（只做定性分析，未予統(tǒng)計(jì)）。
　　第4周末:正常組、模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白無(wú)明顯差異(P＞0.05）。
　　第7周末:與正常組的蛋白定量進(jìn)行比較，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白明顯升高（P＜0.05）;模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠各組間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　第10周末:與正常組相比，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白明顯升高（P＜0.05）:模型組、貝那

7、普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠各組間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　第14周末:與正常組相比，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白明顯升高（P＜0.05）;與模型組相比，貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白明顯降低(P＜0.05);貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白比較，無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　第18周末:與正常組相比，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白明顯升高（P＜0.05）;與模型組相比，貝那普利組、益氣養(yǎng)

8、陰組大鼠尿蛋白明顯降低（P＜0.05）;貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿蛋白比較，無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　3同一時(shí)期不同組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的比較:
　　第4周末:正常組、模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　第7周末:與正常組的尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行比較，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高(P＜0.05);模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠各組間尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

9、比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　第10周末:與正常組相比，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高（P＜0.05）;模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠各組間尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　第14周末:與正常組相比，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高(P＜0.05);與模型組相比，貝那普利組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有所降低，但比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與模型組相比，

10、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)降低，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　第18周末:與正常組相比，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高(P＜0.05);與模型組相比，貝那普利組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有所降低，但比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與模型組相比，益氣養(yǎng)陰組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)降低，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4 IgA腎病大鼠Scr、BUN的比較:
　　正常組、模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)

11、陰組血清Scr、BUN各組間差異不明顯(P＞0.05）。
　　5腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察:
　　5.1光鏡:
　　正常組:腎小球結(jié)構(gòu)完整，系膜、基質(zhì)無(wú)明顯異常改變。
　　模型組:腎小球結(jié)構(gòu)完整，系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多，毛細(xì)血管、腎小管基底膜見(jiàn)不同程度增厚，或伴腎小管萎縮。
　　貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組:腎小球結(jié)構(gòu)完整，系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多，偶爾可見(jiàn)腎小管的萎縮，均較模型組病變減輕。
　　5.2免疫熒

12、光:
　　正常組:腎小球系膜區(qū)未見(jiàn)或少見(jiàn)IgA免疫復(fù)合物沉積。
　　模型組:腎小球系膜區(qū)可見(jiàn)IgA免疫復(fù)合物沿腎小球系膜團(tuán)塊狀分布。
　　貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組:腎小球系膜區(qū)可見(jiàn)不同程度IgA免疫復(fù)合物沿腎小球系膜團(tuán)塊狀分布，較模型組減輕。
　　6免疫組化法測(cè)定α-SMA、TNF-α在腎臟組織的表達(dá):
　　6.1大鼠腎臟組織α-SMA蛋白的表達(dá)
　　與正常組比較，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠腎臟

13、組織中α-SMA的陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.05）;與模型組相比，貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠腎臟組織中α-SMA的陽(yáng)性表達(dá)減弱（P＜0.05）。
　　6.2大鼠腎臟組織TNF-α蛋白的表達(dá)
　　與正常組比較，模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠腎臟組織中TNF-α的陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05);與模型組相比，貝那普利組、益氣養(yǎng)陰組大鼠腎臟組織中TNF-α的陽(yáng)性表達(dá)減弱(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1益氣養(yǎng)陰中藥能