益氣養(yǎng)陰清熱利濕方對(duì)IgA腎病大鼠腎臟組織NF-κB和MCP-1的影響.pdf

1、目的:通過構(gòu)建IgA腎病大鼠模型，予以益氣養(yǎng)陰清熱利濕方進(jìn)行干預(yù)，觀察IgA腎病大鼠病理組織的變化，檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量、腎功能，用免疫組化法、RT-PCR法測(cè)定核因子-κB(NF-κB)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)在大鼠腎臟組織中的表達(dá)，探求益氣養(yǎng)陰清熱利濕方治療IgA腎病的作用機(jī)制，為臨床治療IgA腎病提供新的思路和方法。
　　方法:雄性6周齡SD大鼠，40只，健康、清潔，重量在140～160g左右，在溫度:20℃～

2、24℃，相對(duì)濕度:40％-60％的環(huán)境中，適應(yīng)性飼養(yǎng)7天，第7天末檢測(cè)尿蛋白陰性、潛血陰性者，依據(jù)體重隨機(jī)分為4組:正常組:10只、模型組10只、貝那普利組10只、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組10只。正常組予蒸餾水灌胃，以4ml/kg計(jì)算，隔日1次，連用6周;皮下注射蓖麻油0.6 ml，1次/周，連用9周;于第6、8周末NaCl注射液注入尾靜脈，每只用量0.2ml。模型組、貝那普利組、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組均用濃度為100 g/L免疫原BSA灌胃，每

3、只大鼠用量以400mg/kg(4ml/kg)計(jì)算，連用6周;0.1mlCCl4+0.5ml蓖麻油皮下注射，1次/周，連用9周;于第6、8周末用濃度為0.25g/L脂多糖注射液注入尾靜脈，每只注射0.05mg(0.2ml)。第10周起開始給藥，益氣養(yǎng)陰清熱利濕組用益氣養(yǎng)陰清熱利濕中藥藥液灌胃，貝那普利組用貝那普利混懸液灌胃，正常組、模型組用純凈水灌胃，用藥8周。分別于造模前、第7、第9、第13、第17周末檢測(cè)24h尿蛋白定量。18周末將大

4、鼠禁食水12h，稱重，按照3.50ml/kg用量將10％水合氯醛注入腹腔，進(jìn)行麻醉，于腹主動(dòng)脈取血，測(cè)定肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平。觀察大鼠腎組織病理變化。分別用免疫組化法、RT-PCR法測(cè)定NF-κB、MCP-1在腎組織的表達(dá)情況。結(jié)果:
　　1、24h尿蛋白定量
　　24h尿蛋白定量:用藥干預(yù)后，于第17周末，兩個(gè)治療組（即貝那普利組與益氣養(yǎng)陰清熱利濕組）間相比較，無顯著性差異(P＞0.05)。兩治療組與模型組

5、進(jìn)行比較，尿蛋白均明顯降低，有顯著性差異（P＜0.05）。
　　2、腎功能
　　正常組、模型組及兩治療組（貝那普利組與益氣養(yǎng)陰清熱利濕組）之間差異均不明顯(P＞0.05）。
　　3、腎組織病理改變
　　光學(xué)顯微鏡觀察:在正常組，大鼠腎小球結(jié)構(gòu)完整;在模型組觀察到系膜細(xì)胞增生、系膜基質(zhì)增多;兩治療組（即貝那普利組、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組）大鼠系膜細(xì)胞輕度增生和系膜基質(zhì)增多，相對(duì)于模型組，病變減輕。
　　免疫熒光觀

6、察:主要觀察免疫復(fù)合物沉積在大鼠腎小球系膜區(qū)有無沉積。正常組大鼠腎小球系膜區(qū)未見免疫復(fù)合物沉積，在模型組觀察到有熒光綠色免疫復(fù)合物沉積，兩治療組（即貝那普利組、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組）大鼠也有不同程度的免疫復(fù)合物沉積，但較模型組減輕。
　　4、免疫組化染色法檢測(cè)，NF-κB、MCP-1在腎臟組織的表達(dá)
　　NF-κB陽性表達(dá)情況:正常組弱，其余三組明顯增強(qiáng)(P＜0.05);相對(duì)于模型組，兩治療組（即貝那普利、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組）

7、表達(dá)減弱（P＜0.05）;貝那普利組、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組兩治療組間相比較，無明顯差異(P＞0.05）。
　　MCP-1陽性表達(dá)情況:正常組弱，其余三組明顯增強(qiáng)（P＜0.05）;模型組高于兩治療組（即貝那普利組、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組），差異明顯（P＜0.05）;貝那普利組、益氣養(yǎng)陰清熱利濕組兩治療組間相比較，無明顯差異(P＞0.05)。
　　通過免疫組化法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，NF-κB與MCP-1在腎組織的表達(dá)呈正相關(guān)。
　　5、R

8、T-PCR法檢測(cè)，NF-κB、MCP-1在腎臟組織的表達(dá)
　　相對(duì)于正常組，模型組、兩治療組（即益氣養(yǎng)陰清熱利濕組與貝那普利組）大鼠NF-κB、MCP-1在腎臟組織的表達(dá)均明顯增強(qiáng)(P＜0.05);與模型組比較，益氣養(yǎng)陰清熱利濕組、貝那普利組兩治療組大鼠NF-κB、MCP-1在腎臟組織的表達(dá)均減弱（P＜0.05）;但益氣養(yǎng)陰清熱利濕組與貝那普利組進(jìn)行組間比較，無明顯差異（P＞0.05）。
　　RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果顯示，NF