新合成氮雜查爾酮類衍生物對宮頸癌細胞生長抑制及化療增敏作用.pdf

1、背景及目的:宮頸癌仍是目前導(dǎo)致婦女死亡的主要原因之一，高危型HPV的持續(xù)感染是其主要發(fā)病因素，盡管隨著早期的篩查及先進的醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，宮頸癌的發(fā)生率及死亡率有所下降，但仍存在晚期及轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者的預(yù)后較差的情況，主要在于細胞毒藥物對宮頸癌治療效果不顯著。目前，順鉑聯(lián)合紫杉醇的化療方案是治療晚期宮頸癌的主要手段，可延長患者總生存期3個月，一旦治療失敗，缺乏二線或三線藥物；并且，多種類型的化療藥物相結(jié)合使用后耐藥等副作用現(xiàn)象仍不能有效的

2、避免。因此，很有必要開發(fā)新的能夠增加宮頸癌化療敏感性的生物活性制劑。
　　天然的黃酮類化合物是一類廣泛存在于自然界的多酚類次生代謝產(chǎn)物，具有2-苯基色原酮結(jié)構(gòu),在大多數(shù)的自然植物中含量豐富,分子結(jié)構(gòu)多樣復(fù)雜，可分為：黃酮、黃酮醇、黃烷酮、黃烷酮醇、查爾酮、異黃酮、異黃酮醇、橙酮及黃烷、黃烷醇等多種類型，具有抗氧化、抗衰老、抗病毒、抗心血管疾病、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)腫瘤耐藥性以及增強免疫調(diào)節(jié)功能的多重藥理學(xué)活性。黃酮類化合物對許多惡性

3、腫瘤的體內(nèi)外生長都有明顯抑制作用，對其治療機制的研究也越來越受到關(guān)注，天然的黃酮類物質(zhì)種類多樣，多以結(jié)合體的形式存在，提取過程較復(fù)雜，近年也不斷有合成的黃酮類物質(zhì)問世。本研究使用新合成的氮雜查爾酮衍生物單獨或聯(lián)合奈達鉑，體外觀察其抑制宮頸癌Hela及Siha細胞的生長作用及其對奈達鉑的增敏效應(yīng)，本研究證實了新合成的黃酮類化合物具有明顯的抗宮頸癌細胞增殖以及增敏效應(yīng)。
　　材料及方法:合成了七個具有長鏈共軛結(jié)構(gòu)新型氮雜查爾酮衍生物，

4、并對其進行了活性測定及結(jié)構(gòu)表征；MTT法檢測7種化合物分別對宮頸癌Hela細胞的生長抑制效果，根據(jù)其抑制率（IC50值）進行初篩，選擇IC50值最低的1個化合物作為下一步的實驗藥物，進一步觀察其對HeLa、Siha及HaCaT細胞的生長抑制作用及對奈達鉑的增敏效應(yīng)。劃痕實驗觀察所選化合物對癌細胞的遷徙抑制效應(yīng)，倒置相差顯微鏡下觀察并拍照記錄不同濃度化合處理細胞24小時后形態(tài)的改變，流式細胞儀技術(shù)檢測化合物對細胞周期、凋亡的影響，蛋白免疫

5、印跡法（Westernblot）檢測化合物對宮頸癌細胞中p53蛋白水平的影響。
　　結(jié)果:
　　1.新合成的化合物對 Hela細胞的抑制效果：7種化合物均不同程度的抑制Hela細胞的生長，呈濃度依賴性（IC50值為14.133μM-173.236μM），抑制強度依次為10g號、10f號、10b號、10a號、10d號、10e號、10c號。
　　2.10g號化合物對 Hela、Siha和HaCaT細胞的抑制效應(yīng)：10g號化

6、合物對HeLa及 Siha具有明顯的生長抑制效應(yīng)，且呈濃度依賴性，對 Hela（IC50=14.133μM）細胞的抑制效應(yīng)較Siha（IC50=18.281μM）明顯，而對HaCaT（IC50=243.751μM）細胞只在較高的濃度時才表現(xiàn)出溫和的細胞毒性。
　　3.10g號化合物對奈達鉑的增敏效果：用含2μM的10g號化合物的不同濃度的奈達鉑處理Hela與Siha細胞48小時，在低濃度時其抑制率明顯高于單獨使用奈達鉑時，對Hel

7、a(IC50 NDP:2.878ng/L;NDP+10g:0.937 ng/L)的增敏效果強于Siha(IC50 NDP:11.204 ng/L;NDP+10g:5.927 ng/L)。
　　4.10g號化合物對細胞遷徙的影響：用15μM的10g號化合物處理Hela、Siha及 HaCaT細胞株24小時后，化合物對細胞的遷徙抑制作用為：Hela>Siha>HaCaT。
　　5.10g號化合物對細胞形態(tài)的影響：分別用不同濃度的

8、10g號化合物處理Hela、Siha及HaCaT細胞株24小時后,倒置相差顯微鏡下發(fā)現(xiàn)隨著化合物濃度的增加宮頸癌細胞形態(tài)逐漸趨于漂浮、死亡，HaCaT細胞無明顯變化。
　　6.10g號化合物對細胞周期及凋亡的影響：15μM的10g號化合物對Hela、Siha及HaCaT細胞株24小時后，流式細胞儀技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)Hela及Siha細胞周期明顯阻滯在G0/G1期，24小時后的HeLa、Siha及HaCaT的凋亡率（（12.483±0.4

9、9）％、（1.819±0.78）%、（0.785±0.32）%）顯著高于對照組（（0.882±0.81）%、（0.820±0.21）%、（0.084±0.41）%）。
　　7.10g號化合物對宮頸癌細胞P53蛋白表達水平的影響：15μM10g號化合物的細胞培養(yǎng)液處理宮頸癌Hela及SiHa細胞24小時后，HeLa及Siha細胞中P53蛋白的相對表達量實驗組（0.71±0.095、1.02±1.134）較對照組（0.53±0.071

10、、0.69±0.109）明顯增高。
　　結(jié)論:
　　1．新合成的7個氮雜查爾酮衍生物均對HeLa細胞的增殖具有抑制作用。
　　2．10g號化合物對HPV18陽性的Hela細胞的抑制作用強于對HPV16陽性的Siha細胞，對人正常的HPV陰性的永生化表皮細胞HaCaT有溫和的細胞毒性。
　　3．10g號化合物可以明顯增加宮頸癌細胞株對奈達鉑低濃度時的化療增敏作用。
　　4.新合成的氮雜查爾酮衍生物可能是通過上