無(wú)指盤(pán)臭蛙皮表金黃桿菌分離鑒定及其胞外蛋白酶研究.pdf

1、從無(wú)指盤(pán)臭蛙表皮中分離到一株具有很強(qiáng)胞外蛋白水解酶活性的菌株CW-E2。通過(guò)形態(tài)學(xué)、化學(xué)成分、生理生化和16S rDNA序列分析確定CW-E2的分類(lèi)地位；并深入研究該菌株蛋白水解酶活力及其相關(guān)特性，最終確定該酶為黃質(zhì)金黃桿菌來(lái)源的金屬蛋白酶。 CW-E 2革蘭氏染色反應(yīng)呈陰性，菌體短桿狀，無(wú)鞭毛，透射電鏡觀察，茵體寬0.5-0.7μm，長(zhǎng)1.1-1.3μm，菌落呈圓形，邊緣光滑，直徑1-1-5mm，并且相互粘連，表面光滑并突起，

2、產(chǎn)生黃色素，有金黃色光澤。茵體無(wú)運(yùn)動(dòng)性，細(xì)胞長(zhǎng)有周身菌毛，不產(chǎn)生孢子，好氧，化能異養(yǎng)型。 用微生物biolog GN2和API 20NE系統(tǒng)測(cè)定生理生化結(jié)果為：該菌株能很好的利用D-果糖、D-葡萄糖、D-半乳糖等單糖為唯一碳源生長(zhǎng)，并能夠利用D-果糖、D-麥芽糖、D-海藻糖等發(fā)酵產(chǎn)酸，具有過(guò)氧化氫酶Bβ-半乳糖苷酶，苯丙氨酸脫羧酶等活性；但沒(méi)有鳥(niǎo)氨酸脫羧酶、賴氨酸脫羧酶，DNA酶和脲酶等活性；不能還原硝酸鹽和亞硝酸鹽；能夠強(qiáng)烈的

3、液化分解白明膠；有酪氨酸水解酶活性，能夠水解吐溫80。呼吸鏈主要醌種類(lèi)是六碳烷基側(cè)鏈的甲基奈醌(MK-6)。該菌株無(wú)Na<'+>、維生素等其它特殊營(yíng)養(yǎng)要求，能生長(zhǎng)于0-6％NaCl鹽濃度范圍內(nèi)，其中1％濃度的NaCl是最佳的鹽離子生長(zhǎng)條件。在LB平板上能產(chǎn)生一種不能擴(kuò)散的黃色素fleximbin。菌株溫度范圍是5-42℃，最適生長(zhǎng)溫度是30-35℃；能夠在麥康凱培養(yǎng)基上生長(zhǎng)；不能水解纖維素；對(duì)于羧芐青霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、慶大霉素、青

4、霉素G、卡那霉素、萬(wàn)古霉素、紅霉素、利福平、新霉素、鏈霉素和氯霉素敏感；但對(duì)于氨芐青霉素、林肯霉素和多粘菌素具有較高的耐受性。測(cè)定CW-E 2的G+C mol％含量為37.2％。 CW-E 2的主要脂肪酸是i-C15：0；i-C17：1ω9c；和i-C17：03-OH。16S rDNA序列同源性分析表明，CW-E 2與Cgleum．ATCC 35910T和C.indologenes ATCC 29897T菌株序列同源性均為93.

5、9％，與菌株C.joostei LMG 182/2T的序列同源性為94.9％。 通過(guò)形態(tài)學(xué)、生理生化、脂肪酸和16s rDNA序列同源性多相分析，最終確定CW-E2的分類(lèi)地位為：纖維粘菌-黃桿菌-類(lèi)桿菌(CFB)門(mén)，黃桿菌綱(Flavobacteria)，黃桿菌目(Flavobacteria)，黃桿菌科(Flavobacteriaceae)，金黃桿菌屬(Chryseobacterium)的一個(gè)新種。并將其命名為黃質(zhì)金黃桿菌(Ch

6、ryseobacterium．flavum)。對(duì)其胞外蛋白酶活性進(jìn)行了比較深入的研究。 該菌能在以酪蛋白為底物的蛋白酶檢測(cè)固體培養(yǎng)基上形成明顯的水解暈圈，證明該菌具有很強(qiáng)的蛋白酶水解酶活力。通過(guò)研究證實(shí)：該菌的胞外蛋白酶活力在對(duì)數(shù)期以前隨著細(xì)菌細(xì)胞濃度的增大不斷增強(qiáng)，在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)末期約14h左右酶活達(dá)到最大；該酶的最適作用溫度為50℃；適當(dāng)濃度和特定種類(lèi)的金屬離子能夠促進(jìn)該酶的酶活；微量(2.5mM)金屬離子螯合劑EDTA便可對(duì)該