固定化小分子研究生物分子相互作用的新方法.pdf

1、本論文提出了一種研究蛋白質(zhì)相互作用的新方法：先利用固定化小分子吸附目標蛋白，以形成小分子-目標蛋白復合物，再考察小分子-目標蛋白復合物與其相關(guān)蛋白間的相互作用，并將其應(yīng)用于多巴胺-單胺氧化酶B復合物與其相關(guān)蛋白間相互作用的初步研究以及多巴胺參與下的多巴胺能神經(jīng)細胞中功能蛋白間相互作用的前期研究。 實驗結(jié)果表明：(1)串聯(lián)使用合成的高、低兩種密度多巴胺層析材料能有效地分離純化豬肝單胺氧化酶B。SDS-PAGE凝膠電泳結(jié)果顯示：分

2、離純化出的單胺氧化酶B為單一蛋白質(zhì)帶，Bandscan軟件分析其純度約為95﹪，其相對分子量約為60000Da。純化后的酶比活為8921.4U/mg，純化倍數(shù)為4.9。(2)基于底物與酶的相互作用，利用固定化多巴胺吸附單胺氧化酶B，鎖定結(jié)合狀態(tài)，形成多巴胺-單胺氧化酶B復合物，制備成多巴胺-單胺氧化酶B復合物層析材料，在近似胞內(nèi)液環(huán)境下，通過層析操作獲得了可能參與調(diào)控單胺氧化酶B催化功能的三種調(diào)節(jié)蛋白，相對分子量分布在50000Da～8

3、0000Da。(3)利用多巴胺層析材料有效地吸附了一種多巴胺能神經(jīng)細胞中與固定化多巴胺有較強相互作用的蛋白，MALDI-TOF-MS質(zhì)譜結(jié)果顯示該蛋白的相對分子量為66652，Bandscan軟件分析其純度可達96﹪，可用于進一步研究該蛋白的功能，也可用于研究多巴胺與該蛋白形成的復合物與其相關(guān)蛋白間的相互作用。 以上研究結(jié)果表明：利用固定化生物小分子吸附目標蛋白，以及利用固定化小分子-目標蛋白復合物研究其相關(guān)蛋白的研究方法可行