有機(jī)小分子污染物與生物大分子相互作用的研究.pdf

1、近年來(lái)，由于有機(jī)污染物的大量出現(xiàn)以及人們環(huán)保意識(shí)的提高，各類(lèi)有機(jī)污染毒物性質(zhì)以及其對(duì)人體造成的危害越來(lái)越受到人們的關(guān)注。有機(jī)污染毒物的管理與有害廢棄物的處理是和人們息息相關(guān)的課題，為了更好的控制各種有害有機(jī)物，了解有害物質(zhì)的生命周期及其與生物大分子之間的反應(yīng)機(jī)理是極為重要的。此外小分子與生物大分子的相互作用研究，對(duì)發(fā)現(xiàn)新藥物和在基因水平上疾病的治療，尤其是藥物分子的作用機(jī)理也具有非常重要的意義，因此一直是人們關(guān)注和研究的課題之一。因此，

2、本文選定了一些典型的有機(jī)小分子，以近年來(lái)新發(fā)展起來(lái)的共振光散射(resonancelightscattering，RLS)技術(shù)為基本手段，研究了小分子與蛋白質(zhì)、核酸之間的相互作用。 主要研究?jī)?nèi)容如下： 1.依思明藍(lán)與牛血清白蛋白相互作用 在pH3.78水溶液中，血清白蛋白可與染料探針依思明藍(lán)通過(guò)疏水作用結(jié)合并產(chǎn)生以367.4nm為特征峰的共振光散射(RLS)增強(qiáng)信號(hào)。在該特征波長(zhǎng)下測(cè)定的增強(qiáng)共振光散射強(qiáng)度(

3、ΔIRLS)與血清白蛋白濃度在一定范圍內(nèi)具有線性關(guān)系。據(jù)此建立了痕量血清蛋白的共振光散射分析法。當(dāng)依思明藍(lán)的濃度為1.5×10-5mol/L時(shí)，牛血清白蛋白、人血清白蛋白以及IgG的檢測(cè)限分別可達(dá)2.34ng/mL、6.86ng/mL和10.9ng/mL?；诠舱窆馍⑸鋽?shù)據(jù)及Scatchard圖，獲得依思明藍(lán)與牛血清白蛋白和人血清白蛋白的結(jié)合常數(shù)(K)以及結(jié)合位點(diǎn)數(shù)(n)分別為2.90×105M-1，2.9和2.96×105M-1，0.

4、35。 2.陰離子表面活性劑與白蛋白與球蛋白相互作用的散射偏振研究 在酸性緩沖溶液中，十二烷基硫酸鈉(SDS)可以與人血清白蛋白(HSA)以及免疫球蛋白(IgG)作用并導(dǎo)致共振光散射(RLS)的明顯增強(qiáng)。本文通過(guò)建立偏振共振光散射(PolarizationResonanceLightScattering，PRLS)法，測(cè)得了污染物表面活性劑與蛋白質(zhì)作用的差異，表明可利用共振光散射偏振度(Pψβ)的不同來(lái)對(duì)上述兩種相對(duì)

5、分子量相差較大的蛋白質(zhì)(HSA66kDa；IgG150kDa)與SDS反應(yīng)的體系進(jìn)行區(qū)分，所獲結(jié)論與粒徑分析數(shù)據(jù)一致。 3.十二烷基硫酸鈉誘導(dǎo)人血清白蛋白聚集 在pH3.78水溶液中，隨著HSA的加入，出現(xiàn)粒徑變小并所測(cè)動(dòng)態(tài)光散射(DynamicLightScattering，DLS)數(shù)值由不穩(wěn)定向穩(wěn)定過(guò)渡的現(xiàn)象，說(shuō)明SDS能夠引起蛋白質(zhì)的聚集。該結(jié)論與共振光散射方法所得結(jié)論一致。 4.鹽酸小檗堿與DNA作

6、用的特異性 基于分子吸收和熒光發(fā)射，測(cè)定發(fā)現(xiàn)鹽酸小檗堿(BBH)特別親和G堿基，隨著序列中G堿基數(shù)目增大，BBH與DNA的結(jié)合就越強(qiáng)。如果互補(bǔ)的雙鏈中不存在G堿基，BBH與該互補(bǔ)體的結(jié)合將不穩(wěn)定，從而實(shí)現(xiàn)G堿基錯(cuò)配測(cè)定。利用HyperchemProfessional軟件包計(jì)算了dCMP、dGMP、dAMP和dTMP中的電荷分布，并在此基礎(chǔ)了進(jìn)一步探討了鹽酸小檗堿與寡聚核苷酸之間的作用機(jī)理，表明靜電作用和鍵長(zhǎng)等引起的空間電子云密