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文檔簡介
1、雙尾-C基因（Bicaudal-C)首先在果蠅(Drosophila melanogaster)中被發(fā)現(xiàn),其功能喪失導(dǎo)致果蠅胚胎濾泡細(xì)胞的錯誤遷移、頭部的缺失和雙尾結(jié)構(gòu)的形成。多個物種都含有該基因的同源基因,其中小鼠同源基因Biccl的缺失導(dǎo)致小鼠產(chǎn)生與人類多囊腎疾病高度相似的癥狀,但其具體功能還未知。 克隆小鼠Biccl基因(GeneID：83675)是研究其基因產(chǎn)物功能的基礎(chǔ),本研究以小鼠腎臟組織總RNA為模板體外反轉(zhuǎn)錄為c
2、DNA,通過分段巢式PCR及酶切連接的方法獲得了全長約3Kb、無突變的小鼠Biccl cDNA序列,并成功構(gòu)建其真核表達(dá)載體pCMV-Tag 4A-Biccl。 根據(jù)生物信息學(xué)分析結(jié)果,選擇兩個免疫原性較好的蛋白區(qū)段61E-199A和711Q-858D作為抗原,PCR擴(kuò)增相應(yīng)的小鼠BicclcDNA編碼片段,并成功構(gòu)建其原核表達(dá)載體；IPTG誘導(dǎo)表達(dá),回收并純化融合蛋白GST-Biccl-N-His6和GST-Biccl-N-H
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