ET-1、TGF-β1在心律失常大鼠心肌中的表達(dá)及對(duì)BNP的影響.pdf

1、目的:室性心律失常(ventricular arrhythmia，VA)是尸體解剖及病理組織學(xué)檢查均為陰性的不明原因心源性猝死(sudden cardiac death，SCD)的主要組成部分，目前對(duì)于此類法醫(yī)病理學(xué)鑒定仍停留在陰性解剖并謹(jǐn)慎地排除其他死因的層面上。腦鈉肽(brain natriuretic peptide，BNP)作為臨床應(yīng)用的反映心功能狀態(tài)的重要指標(biāo)之一，在法醫(yī)病理學(xué)心功能障礙所致SCD的認(rèn)定中也起到重要的作用。課題

2、組的前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在心律失常發(fā)生后30分鐘左右大鼠血漿、心室肌中BNP表達(dá)升高。然而，在實(shí)際檢案工作中，心律失常所致猝死發(fā)生急驟，心包液及心血中BNP水平還未來得及升高。臨床試驗(yàn)表明，在心肌梗死、心肌缺血等患者的血液中，內(nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1)出現(xiàn)與BNP同步的高表達(dá)，轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-beta1，TGF-β1）則與心肌梗死(myocardialinfarc

3、tion，MI)及心功能障礙的發(fā)生密切相關(guān)。機(jī)械應(yīng)力、缺血缺氧等均能夠誘導(dǎo)BNP、ET-1及TGF-β1的合成及分泌，而在心律失常中，ET-1和TGF-β1的表達(dá)情況，及BNP的合成是否與ET-1、TGF-β1相關(guān)仍屬未知。本研究通過經(jīng)頸靜脈定時(shí)定量推注BaCl2溶液建立大鼠心律失常模型，檢測(cè)心律失常后大鼠心肌組織中ET-1、TGF-β1的表達(dá)，并應(yīng)用PD142893（ETA/B拮抗劑）及SB431542(TβR拮抗劑)，初步探討心律失

4、常發(fā)生時(shí)ET-1、TGF-β1對(duì)心肌組織中生成的BNP影響。
　　研究方法:第一部分論文中，選取健康成年雄性SD大鼠，4％水合氯醛腹腔注射麻醉后仰臥位固定，經(jīng)左側(cè)頸靜脈用微量注射泵按0.004ml/100g體重推注10％BaCl2溶液建立大鼠心律失常模型，同時(shí)應(yīng)用Powerlab生物信號(hào)采集系統(tǒng)監(jiān)測(cè)大鼠心電圖(ECG)、心率及左心室內(nèi)血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)。96只大鼠隨機(jī)分為BaCl2組及Saline組，每組48只大鼠，BaCl2組于對(duì)應(yīng)

5、時(shí)間節(jié)點(diǎn)(0min、5 min、10 min、20 min、30 min、60 min)注入2倍劑量BaCl2溶液處死動(dòng)物，Saline組按相同體積經(jīng)頸靜脈注射生理鹽水，后以頸椎脫位的方式處死。應(yīng)用免疫組織化學(xué)(IHC)、Western blot、Real-time PCR檢測(cè)大鼠心肌組織中BNP、ET-1及TGF-β1的表達(dá)。
　　第二部分論文中，首先選取SD大鼠35只，隨機(jī)分Vehicle、PD0.1mg/kg、PD0.5mg

6、/kg、PD1.0mg/kg、SB1.0mg/kg、SB2.5mg/kg、SB5.0mg/kg七個(gè)處理因素組，于大鼠注射BaCl2溶液誘導(dǎo)心律失常前30min腹腔注射溶劑或抑制劑，心律失常30min后處死比較心肌組織中BNP的表達(dá)。隨后，選取SD大鼠192只，隨機(jī)分Vehicle組、PD0.1 mg/kg組、SB2.5mg/kg組及雙抑制劑(PD+SB)組4個(gè)處理因素組，將每個(gè)處理因素組的48只大鼠按前述處死時(shí)間及給藥方式隨機(jī)分成6個(gè)亞

7、組逐一操作，動(dòng)物處死后比較大鼠心肌組織中BNP、ET-1及TGF-β1m的表達(dá)。
　　數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示。應(yīng)用PRISM6.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，當(dāng)p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1、ECG及血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，經(jīng)頸靜脈定時(shí)定量注入BaCl2溶液后，大鼠ECG顯示以室性快速型心律失常為主的波形，心律失常后大鼠心率加快，LVEDP升高，LVSP降低，心律失常持續(xù)30min后心功能出現(xiàn)失代

8、償。2、HE染色結(jié)果顯示，BaCl2組大鼠心肌切片出現(xiàn)心肌嗜伊紅染色增強(qiáng)、波浪樣變、小片狀心肌間質(zhì)出血等非特異性心肌缺血改變。3、心律失常后，BaCl2組左心室BNP蛋白及mRNA在10min升高，20min略有下降，30min再次升高;ET-1蛋白及mRNA于心律失常發(fā)生10min后持續(xù)升高;TGF-β1蛋白在心律失常發(fā)生時(shí)表達(dá)無明顯差異，TGF-β1mRNA在0min及5min表達(dá)降低。4、Vehicle組各指標(biāo)表達(dá)與BaCl2組相

9、似，與Vehicle組相比，單獨(dú)應(yīng)用PD142893、SB431542及兩種抑制劑聯(lián)合應(yīng)用后，左心室中BNP及BNP mRNA水平降低組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1、經(jīng)頸靜脈定時(shí)定量泵注BaCl2溶液能夠穩(wěn)定誘導(dǎo)大鼠發(fā)生室性心律失常，心律失常持續(xù)30min后出現(xiàn)心功能障礙。2、BNP、ET-1蛋白及mRNA在BaCl2溶液誘導(dǎo)心律失常發(fā)生時(shí)表達(dá)增加，且具有時(shí)間規(guī)律性。3、BaCl2誘導(dǎo)大鼠心律失常中，ET-1、TGF-β1均參