TRPC參與心肌APD頻率依賴性及抗心律失常藥物對TRPC表達的影響.pdf

1、經典瞬時受體電位通道(transient receptor potential canonical,TRPC)包括七個家族成員TRPC1-7,是一類鈣通透的非選擇性陽離子通道,它們與心血管系統(tǒng)疾病關系密切,在心律失常、竇房傳導阻滯、心肌肥厚、心肌病及心力衰竭中發(fā)揮作用。本實驗旨在研究TRPC家族是否參與APD頻率依賴性及抗心律失常藥物對TRPC蛋白表達的影響。
　　第一部分，TRPC參與豚鼠心室乳頭肌APD頻率依賴性
　　目

2、的:
　　觀察不同頻率刺激下豚鼠右心室乳頭肌動作電位APD的變化是否存在頻率依賴性,并測定不同刺激頻率下TRPC蛋白表達量是否變化。
　　方法:
　　采用標準微電極細胞內跨膜動作電位記錄技術,記錄不同刺激頻率(0.2Hz、0.5Hz、1Hz、2Hz、3Hz、4Hz、4.5Hz、5Hz)下,乳頭肌APD的變化情況。運用Westernblot的方法,測定1Hz、3Hz、4.5Hz頻率下乳頭肌標本內TRPC蛋白表達量。

3、>　　結果:
　　1.在刺激頻率為0.2Hz、0.5Hz、1Hz、2Hz、3Hz、4Hz、4.5Hz、5Hz的情況下,隨著刺激頻率的增加,乳頭肌跨膜動作電位APD逐漸縮短,呈現明顯的頻率依賴性。
　　2.與1Hz組相比,3Hz刺激下豚鼠右心室乳頭肌動作電位復極至50％、90%的時程(APD50、APD90)分別縮短(40.1±8.2)%、(33.7±6.3)%;4.5Hz刺激下豚鼠右心室乳頭肌動作電位復極至50%、90%的時

4、程(APD50、APD90)分別縮短(47.2±9.5)%、(44.1±7.3)%。
　　3.與1Hz組相比,3Hz組和4.5Hz組乳頭肌TRPC1、TRPC3、TRPC6表達量均有顯著下降,并表現出相應的頻率依賴性特點,即隨著刺激頻率的增大,TRPC1、3、6的表達量遞減。
　　小結:
　　再次證實豚鼠心室乳頭肌心肌細胞動作電位時程存在頻率依賴性特征。本實驗發(fā)現,隨刺激頻率的增加,除心肌動作電位時程縮短外,同時,TR

5、PC蛋白表達量也隨之改變,提示TRPC參與心肌APD頻率依賴性。
　　第二部分，抗心律失常藥物對TRPC蛋白表達量的影響
　　目的:
　　觀察不同種類抗心律失常藥物作用的頻率依賴性方式(特點),并觀察抗心律失常藥物對TRPC蛋白表達量是否影響。
　　方法:
　　采用標準微電極細胞內跨膜動作電位記錄技術,記錄Nef、AM、Qd給藥前后對乳頭肌動作電位復極至50%、90%的時程(APD50、APD90)的影響。

6、采用Westernblot的方法測定不同給藥組和對照組乳頭肌標本的TRPC蛋白表達量。
　　結果:
　　1.在刺激頻率分別為1Hz、3Hz、4.5Hz的條件下,Nef30μmol/L、AM10μmol/L、Qd5μmol/L均可延長豚鼠右心室乳頭肌的APD,但延長的相對百分比(ΔAPD/APD)不同。1、3、4.5Hz下,與給藥前相比,Nef30μmol/L延長APD90百分比分別為(4.3±2.4)%、(14.3±3.6)

7、%和(28.5±6.2)%,表現出順頻率依賴性的特點;AM10μmol/L延長APD90百分比分別為(17.1±2.4)%、(19.5±3.5)%、(15.9±6.7)%,表現為非頻率依賴性特點;Qd5μmol/L延長APD90百分比分別為(13.3±3.1)%、(5.7±1.7)%、(3.6±1.5)%,表現出逆頻率依賴性特點。
　　2.與對照組相比,Nef、AM、Qd給藥組均影響乳頭肌TRPC1、TRPC3、TRPC6表達量,

8、其中Nef組明顯增加TRPC蛋白表達。
　　小結:
　　1.各種抗心律失常藥以不同頻率依賴性方式(特點)影響心肌動作電位時程的頻率依賴性,Nef30、AM10和Qd5μmol/L延長心肌APD的作用,分別表現為順頻率、非頻率、逆頻率依賴性特點。
　　2.不同種類的抗心律失常藥物均可影響TRPC蛋白的表達,Nef30μmol/L顯著增加TRPC1、3、6蛋白表達,與對照組相比,分別是其2.26倍、2.32倍、2.34倍。