小鼠ATP8A2和CDC50A的相互作用及其對于亞細(xì)胞定位的影響.pdf

1、真核生物細(xì)胞各種膜結(jié)構(gòu)兩側(cè)的磷脂分布是不對稱的，這種不對稱需要磷脂翻轉(zhuǎn)酶的動態(tài)調(diào)節(jié)。目前認(rèn)為這些酶可以分為三種，爬行酶，外翻酶和內(nèi)翻酶，對于它們的研究才剛剛起步。P型ATP酶第四類亞型被認(rèn)為有潛在的磷脂內(nèi)翻酶活性，酵母全部五個該家族的蛋白如DRS2p等都陸續(xù)被確定了具有磷脂內(nèi)翻酶的活性，并且還發(fā)現(xiàn)該類蛋白對于細(xì)胞極性建立和膜泡運(yùn)輸有重要作用。另一類保守的兩次跨膜蛋白CDC50家族成員，可以和酵母Drs2p等內(nèi)翻酶相互作用，并且對于它們各

2、自正確的亞細(xì)胞定位是必須的。進(jìn)一步研究表明，酵母內(nèi)翻酶需要在CDC50家族蛋白的幫助下，才能參與膜泡形成，蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)等過程。哺乳動物中由基因組比對已發(fā)現(xiàn)14個P型ATP酶第四類亞型成員，但目前對于它們的研究僅局限于病理方面。為了能夠了解哺乳動物磷脂內(nèi)翻酶在細(xì)胞內(nèi)活動的分子機(jī)制，我們克隆了酵母DRS2p在哺乳動物中的同源物ATP8A2，以及和ATP8A2有可能有相互作用的小鼠CDC50A基因。通過組織RT-PCR和免疫熒光，確定ATP8A2

3、和CDC50A在相同的組織中表達(dá)，并且在細(xì)胞內(nèi)共定位。將ATP8A2和CDC50A共轉(zhuǎn)入細(xì)胞，它們可以從細(xì)胞裂解液中互相免疫共沉淀。共轉(zhuǎn)ATP8A2和CDC50A時它們共定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和溶酶體。但當(dāng)單轉(zhuǎn)CDC50A時，僅被檢測到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位，無法遷移到溶酶體；同樣，當(dāng)單轉(zhuǎn)ATP8A2時，大部分滯留于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，無法遷移到溶酶體。這樣，ATP8A2和CDC50A的相互作用對于它們各自從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到溶酶體的遷移有重要作用。在克隆ATP8A2時還發(fā)現(xiàn)它有