單核苷酸的制備及分離.pdf

1、5'-核苷酸是核糖核酸的水解產(chǎn)物，在食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景，因此研究開發(fā)經(jīng)濟(jì)可行的核苷酸生產(chǎn)方法已經(jīng)引起人們的廣泛關(guān)注。本課題對酶法降解核糖核酸以及離子交換層析法分離核苷酸的工藝條件進(jìn)行了研究，建立了酶解降解核糖核酸和離子交換層析法分離核苷酸的工藝技術(shù)路線。
　　 對酶解法生產(chǎn)核苷酸工藝條件進(jìn)行了研究，考察了底物濃度、酶加量、反應(yīng)溫度、酶解時間、酶解反應(yīng)pH等對酶解率的影響，確定了5'-磷酸二酯酶水解核糖核酸的

2、工藝參數(shù)：核糖核酸濃度為1％，酶加量為35u/gRNA，水解溫度為65℃，核糖核酸溶液初始pH為5.2，酶解反應(yīng)時間為48h。在以上水解條件下，酶解反應(yīng)最完全，RNA的酶解率達(dá)到了85.60％。
　　 研究了陽離子交換層析法分離5‘-核苷酸工藝條件，考察了核苷酸上樣pH、上樣量、洗脫劑、洗脫流速等因素對核苷酸分離的影響，確定了陽離子交換層析法對核苷酸初步分離的工藝條件：核苷酸溶液的上樣pH值為2.0，上樣量為1.0g/L樹脂，洗

3、脫液采用蒸餾水，洗脫液流速為0.15BV/h。在以上層析條件下經(jīng)過兩次層析分離，可實現(xiàn)四種5‘-核苷酸初步分離，其中5'-GMP，5'-AMP，5'-CMP的純度分別達(dá)到了：96.9％，93.65％，94.78％，對應(yīng)的收率分別為89.16％,83.24％,81.39％，5'-UMP的純度僅為76.40％，需進(jìn)一步分離純化。
　　 論文研究了陰離子交換層析法分離純化5'-UMP工藝條件，考察了5'-UMP上樣pH、洗脫液等關(guān)鍵因