內(nèi)皮素及其受體對(duì)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用.pdf

1、腫瘤細(xì)胞受體及其細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)異常在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用，以受體及其細(xì)胞信息傳導(dǎo)為靶點(diǎn)的腫瘤靶向治療是近年腫瘤學(xué)研究熱點(diǎn)。許多惡性腫瘤細(xì)胞可大量合成、釋放內(nèi)皮素-1(Endothelin-1，ET-1)并高表達(dá)內(nèi)皮素受體(Endothelin receptor，ETR)，ET-1是強(qiáng)大的細(xì)胞促有絲分裂素，在一些腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和腫瘤血管新生中起重要作用，ET-1受體拮抗劑已在臨床上用于治療一些惡性腫瘤并取得令人滿意的療效。研究顯示，肺

2、癌組織及細(xì)胞株高表達(dá)ET-1及ETR，肺癌患者血漿ET-1含量較正常人高，肺癌血管存在ET-1結(jié)合位點(diǎn)。這些提示ET-1可能參與肺癌細(xì)胞增殖和肺癌血管生成，影響肺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。但目前ET-1對(duì)肺癌細(xì)胞增殖的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本課題通過(guò)研究ET-1對(duì)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，探討ET-1在肺腺癌發(fā)展中的作用，為探索以ETR及其細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)為靶點(diǎn)的肺癌靶向治療新途徑打下基礎(chǔ)。 本研究主要內(nèi)容包括采用反轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)

3、法檢測(cè)肺腺癌SPC-Al細(xì)胞中ET-1及ETR的mRNA表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法(ELISA)、蛋白印跡法(Western-blot)檢測(cè)SPC-Al細(xì)胞中ET-1及ETR的蛋白表達(dá)，四唑鹽(MTT)顯色分光光度法測(cè)定外源ET-1對(duì)SPC-Al細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，及測(cè)定ETR特異性拮抗劑、鈣離子通道阻滯劑對(duì)ET-1誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1．SPC-Al細(xì)胞中有ET-1、ETA受體及ETB受體的mRNA表達(dá)。

4、 2．SPC-Al細(xì)胞中有ET-1、ETA受體及ETB受體的蛋白表達(dá)。 3．ET-1(10<'-15>-10<'-11>mol/L)具有促SPC-Al細(xì)胞增殖的作用，作用呈濃度依賴(lài)性，在10<'-11>mol/L10<'-9>-mol/L時(shí)作用呈飽和狀態(tài)。 4．ET-1促SPC-Al細(xì)胞增殖作用可被ETA受體拮抗劑BQ123阻斷，ETB受體拮抗劑BQ788對(duì)ET-1促SPC-A1細(xì)胞增殖作用無(wú)影響。 5．

5、ETA受體拮抗劑BQ123可以顯著降低sPC-Al細(xì)胞基礎(chǔ)生長(zhǎng)率，ETB受體拮抗劑BQ788無(wú)此作用。 6．用EDTA(0.4 mmol/L)去除細(xì)胞外鈣離子及電壓依賴(lài)型Ca<'2+>通道阻滯劑nifedipine(1μmol/L)能抑制ET-1誘導(dǎo)的肺腺癌細(xì)胞增殖。 研究結(jié)果結(jié)果表明，人肺腺癌SPC-Al細(xì)胞可自分泌ET-1，ET-1通過(guò)ETA受體促SPC-A1細(xì)胞生長(zhǎng)，細(xì)胞外Ca<'2+>通過(guò)電壓依賴(lài)型Ca<