肝臟缺血-再灌注損傷對老年患者術(shù)后認(rèn)知功能的影響.pdf

1、目的：通過對肝臟部分切除手術(shù)不同肝門阻斷方式的比較，探討肝臟缺血/再灌注損傷對老年患者術(shù)后認(rèn)知功能的影響及IL-6、TNF-α的表達(dá)。
　　方法：選擇行擇期肝臟部分切除手術(shù)患者40例，性別不限，年齡65～80歲，體重50～80Kg，心功能Ⅱ～Ⅲ級，ASA分級Ⅱ～Ⅲ級；按照 Child-Pugh分級標(biāo)準(zhǔn)選擇肝功能分級 A級，小學(xué)以上文化程度，無藥物成癮史、無精神病史。隨機(jī)將患者分為2組(n=20)：對照組（ CON組）和肝門阻斷組（

2、缺血再灌注 I/R組），對照組僅行肝臟部分切除術(shù)不阻斷肝門。麻醉誘導(dǎo)：咪唑安定0.03 mg.kg-1、異丙酚0.5～1 mg.kg-1、舒芬太尼0.3～0.4μg kg-1、順式阿曲庫銨0.2 mg.kg-1，進(jìn)行氣管內(nèi)插管，接麻醉機(jī)，IPPV模式通氣， PETCO2維持在35～40 mmHg。麻醉維持：全憑靜脈，TCI模式，設(shè)定瑞芬太尼血漿靶濃度3～5 ng.ml-1、異丙酚血漿靶濃度1～3μgml-1，間斷靜脈推注順式阿曲庫銨0.

3、01～0.02mg/kg/h，BIS值術(shù)中維持在40～60。記錄術(shù)中血氧飽和度（SPO2）、平均動脈壓（MAP）、體溫（T）和心率（HR）。分別于手術(shù)前1天、術(shù)后第4天留取血液標(biāo)本，檢測 IL-6、TNF-α含量及谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）的變化，同時進(jìn)行一次神經(jīng)心理學(xué)測評（如：累加測試、數(shù)字符號測試、循跡連線測試A/B、順/倒背數(shù)字廣度等），根據(jù)Murkin JM推薦的Z分計算法對術(shù)后患者是否有認(rèn)知功能障礙進(jìn)行判斷：即

4、將術(shù)后神經(jīng)心理學(xué)測評分與術(shù)前測評分之差的絕對值除以該測試項(xiàng)目健康對照組基準(zhǔn)值（第一次測試結(jié)果）的標(biāo)準(zhǔn)差,即為該單項(xiàng)的Z分值,各單項(xiàng)Z分值相加除以基準(zhǔn)Z值相加的標(biāo)準(zhǔn)差得到復(fù)合Z分,兩次單項(xiàng)Z分值或復(fù)合Z分大于或等于1.96，則判定為術(shù)后認(rèn)知功能障礙。統(tǒng)計學(xué)處理：采用 SPSS15.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料比較采用 X2檢驗(yàn)，計量資料以x±s表示，組間比較采用單因素方差分析,組內(nèi)比較采用配對 t檢驗(yàn)， P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　

5、　結(jié)果：40例患者均完成實(shí)驗(yàn)測試。兩組一般情況以及不同時間點(diǎn)的生命體征比較無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　1.CON組在術(shù)后第4天血漿IL-6為267.81±52.63ng/L、TNF-α為2.96±0.32μg/L相比術(shù)前表達(dá)明顯增加（P＜0.05)；I/R組在術(shù)后第四天 IL-6為353.29±61.46ng/L、TNF-α為11.35±1.27μg/L高于術(shù)前1天（P＜0.05)及 CON組在術(shù)后第四天的數(shù)值（P＜0.05)。
　

6、　2.與術(shù)前相比，兩組患者術(shù)后谷丙轉(zhuǎn)氨酶，谷草轉(zhuǎn)氨酶增加，術(shù)后第四天達(dá)高峰，I/R組明顯高于CON組（P＜0.05)。
　　3.神經(jīng)心理學(xué)測評結(jié)果：CON組有4例患者Z值大于1.96、I/R組有11例患者Z值大于1.96，POCD的發(fā)生率分別為16％和55%，I/R組高于CON組（P＜0.05)。
　　結(jié)論：肝臟缺血再灌注損傷可導(dǎo)致老年患者術(shù)后認(rèn)知功能障礙的發(fā)生機(jī)率增加，并伴隨血漿IL-6和TNF-α表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.05）

7、。
　　目的：通過對老年大鼠不同時程的肝臟缺血/再灌注損傷術(shù)后行為學(xué)實(shí)驗(yàn)的觀察，以及對大鼠海馬 CA1區(qū)突觸群峰電位的測量、PKCγ(蛋白激酶Cγ亞型)及NF-κB（核因子-κB）表達(dá)的觀測。探討肝臟缺血/再灌注損傷對老年大鼠術(shù)后認(rèn)知功能的影響。
　　方法：選擇經(jīng)水迷宮實(shí)驗(yàn)篩選后合格的老年雄性 SD大鼠160只，年齡20—25月，體重300-350g。制作大鼠肝實(shí)質(zhì)部分缺血模型：用無損傷動脈夾夾住大鼠肝門靜脈和肝左動脈，觀察

8、被阻斷區(qū)肝葉顏色變化（暗紅色改變），同時監(jiān)測大鼠尾動脈血壓的變化（使用 BP-98A無創(chuàng)血壓儀）。隨機(jī)將大鼠分為4組，每組40只；1.假手術(shù)組(Sham)：僅開腹、游離肝動脈及肝靜脈、不進(jìn)行任何肝臟動靜脈阻斷；2.缺血20、30、40 min/再灌注組：三組大鼠肝門靜脈及肝左動脈分別阻斷20、30、40min后，隨即松開動脈夾再灌注；分別記作 I/R（20）組、I/R（30）組，I/R（40）組，各組再灌注30min后，分別切取缺血區(qū)的

9、部分肝臟組織（2mm*2mm*2mm）標(biāo)本以備用。為避免術(shù)后感染，模制造成功后進(jìn)行抗感染治療3天。4組大鼠每組組內(nèi)再隨機(jī)對半分成兩組,每組20只，分別進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)及避暗實(shí)驗(yàn)。Morris水迷宮分為兩個階段：第一階段，術(shù)后第4～10天行定位巡航試，觀測比較定位巡航潛伏期時間長短；第二階段，術(shù)后第11～18天行空間探索實(shí)驗(yàn)，觀測穿環(huán)次數(shù)、平均速度等。各階段實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠放入密閉小容器，乙醚麻醉后，快速斷頭取腦，放入0～4℃人

10、工腦脊液中，稍變硬后，分離海馬，并沿矢狀面將其切成0.4 mm厚的腦片，放入人工腦脊液中，34℃孵育備用，人工腦脊液中持續(xù)通入混合氣體95%O2和5%CO2。雙脈沖方波刺激海馬 CA3區(qū) Schaffer側(cè)支，記錄海馬 CA1區(qū)錐體細(xì)胞誘發(fā)的群峰電位（population spike，PS）的峰值；另取部分腦片行尼氏體染色電鏡觀察海馬神經(jīng)元細(xì)胞尼氏體的機(jī)構(gòu)變化，以及免疫組化染色分析 NF-κB、PKCγ的表達(dá)。數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析：SPS

11、S15.0統(tǒng)計軟件，以x±s形式表示數(shù)據(jù)，組間比較采用單因素方差分析(ANVOA)，認(rèn)為P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1.缺血區(qū)肝組織電鏡下的形態(tài)學(xué)比較：與 Sham組比較， I/R（20）、I/R（30）、I/R（40）組的線粒體腫脹、有空泡變性、嵴破壞、足腫、溶酶體、核糖體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少。其中I/R（40）組表現(xiàn)最為明顯。
　　2.水迷宮實(shí)驗(yàn)比較：與 Sham組相比，I/R（20）、I/R（30）、

12、I/R（40）組于術(shù)后第4～10天定位巡航試驗(yàn)中的潛伏期時間比 Sham組長(P<0.05)，有統(tǒng)計學(xué)差異；與I/R（20）、I/R（30）組相比，I/R（40）組于術(shù)后第7～10天定位巡航潛伏期時間較長(P<0.05)，有統(tǒng)計學(xué)差異。與 Sham組比較：I/R（40）組于術(shù)后第11天空間探索實(shí)驗(yàn)穿環(huán)次數(shù)、平均速度、平均時間低于Sham組，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；I/R（20）、I/R（30）組與 Sham組比較無統(tǒng)計學(xué)差異；術(shù)后

13、第18天，空間探索中的各實(shí)驗(yàn)指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.避暗實(shí)驗(yàn)比較：與 Sham組比較，I/R（20）、I/R（30）及 I/R（40）組在術(shù)后第4～8天，活動路線錯誤次數(shù)和潛伏期時間較 Sham組高，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。
　　4.到術(shù)后第10天，各組大鼠潛伏期和活動路線錯誤次數(shù)比較，無統(tǒng)計學(xué)差異。5.光鏡下 I/R（40）組在術(shù)后第10天空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，海馬尼氏體排列整齊、數(shù)量較 I/R（20）及

14、I/R（30）組有所減少，且胞漿腫脹；其它各組海馬神經(jīng)元、尼氏體、細(xì)胞核結(jié)構(gòu)未見無明顯異常，術(shù)后第18天，光鏡下見緊密排列，尼氏體結(jié)構(gòu)正常，各組大鼠未見異常。
　　6.海馬腦片神經(jīng)電生理實(shí)驗(yàn)：與 Sham組相比， I/R（20）、I/R（30）、I/R（40）組于術(shù)后第10天海馬 CA1區(qū)錐體細(xì)胞誘發(fā)的群峰電位（ population spike，PS）的峰值低于 Sham組，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；與 I/R（20）、I/

15、R（30）組相比，I/R（40）組于術(shù)后第10天海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞誘發(fā)的PS電位峰值低，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；到術(shù)后第18天時，各組群峰電位（PS）峰值無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　7.海馬 CA3區(qū) PKCγ及 NF-κB的表達(dá)：術(shù)后第10天，與 Sham組比， I/R（20）、I/R（30）和 I/R（40）PKCγ及 NF-κB的表達(dá)均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；其中 I/R（40）組 PKCγ陽性細(xì)胞表達(dá)