背側(cè)紋狀體GABAAα1亞基在ATS成癮機制中的研究.pdf

1、目的:
　　1.研究GABAAα1參與甲基苯丙胺(Methamphetamine，METH)成癮相關(guān)獎賞記憶的機制;
　　2.研究miRNA和泛素化系統(tǒng)通過調(diào)控GABAAα1表達，參與METH成癮相關(guān)獎賞記憶的機制。
　　方法:
　　采用代表 METH成癮相關(guān)獎賞記憶的條件位置偏愛的大鼠動物模型（Conditioned place preference，CPP)作為研究工具，圍繞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)起主要抑制性作用的G

2、ABAA受體展開研究，特別聚焦于在神經(jīng)中樞分布最廣泛的含有α1的GABAA受體。
　　結(jié)果:
　　一、GABAAα1參與了METH成癮相關(guān)獎賞記憶機制的形成
　　在使用METH制作 CPP模型以后,western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有背側(cè)紋狀體（Dorsal striatum，Dstr）的GABAAα1蛋白表達下調(diào)，Real-Time PCR顯示GABAAα1 mRNA的表達水平?jīng)]有變化。其他四個腦區(qū)（內(nèi)側(cè)前額葉皮層、

3、伏隔核、杏仁核、背側(cè)海馬）的GABAAα1蛋白表達沒有改變，其它一些常見 GABAA亞型（GABAAα2、GABAAα3、GABAAα5、GABAAβ2）蛋白表達也沒有改變。進一步，我們向雙側(cè)Dstr微注射GABAA受體激動劑muscimol或?qū)Ｒ恍葬槍Ζ?GABAA受體的激動劑zolpidem都可以明顯減弱METH誘發(fā)的CPP的形成。我們的發(fā)現(xiàn)提示Dstr的GABAAα1在METH獎賞記憶形成中具有非常重要的作用。
　　二、ME

4、TH成癮過程中，泛素化連接酶SYVN1參與調(diào)控了GABAAα1的下調(diào)
　　我們先后從miRNA和泛素化的角度研究影響GABAAα1下調(diào)的因素：在miRNA的研究中，我們首先用生物信息學(xué)軟件、文獻報道和前期的芯片研究結(jié)果預(yù)測了21個最有可能調(diào)控GABAAα1的miRNA，然后用Real-Time PCR的方法進行篩查，但是沒有篩查出調(diào)控GABAAα1的miRNA，提示METH-CPP大鼠Dstr的GABAAα1的表達下調(diào)，可能不是由

5、miRNA參與調(diào)控的。
　　在泛素化的研究中，我們發(fā)現(xiàn)泛素化過程參與了 METH-CPP的形成和GABAAα1的表達下調(diào)，更深入的研究發(fā)現(xiàn)泛素化連接酶SYVN1參與了這個過程，我們用免疫共沉淀實驗和原代紋狀體神經(jīng)元的慢病毒干擾實驗均證實 SYVN1參與調(diào)控了GABAAα1的表達下調(diào)。提示抑制SYVN1誘導(dǎo)的GABAAα1降解，是改善METH成癮導(dǎo)致的GABAAα1下調(diào)的有效途徑。
　　結(jié)論:
　　Dstr的GABAAα