RSUME與IκB-NF-κB在小鼠垂體腺瘤AtT-20細(xì)胞中的表達(dá)及其意義.pdf

1、研究背景與目的：
　　垂體腺瘤是成人常見的神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤之一，大部分垂體腺瘤是良性腫瘤，對周圍組織不具有侵襲破壞能力，但約43％垂體腺瘤因具有侵襲性導(dǎo)致手術(shù)難以完全切除或者切除難度增大，并且術(shù)后復(fù)發(fā)率較高。RWD結(jié)構(gòu)小泛素化增強子（RWDcontainingsumoylationenhancer，RSUME）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種在垂體腺瘤中高表達(dá)且可以調(diào)控小泛素化過程的因子。在缺氧等刺激因素下，可以誘導(dǎo)RSUME快速生成增加，RSUM

2、E與小泛素相關(guān)修飾因子-1（smallubiquitinrelatedmodifiers-1，SUMO-1）在泛素結(jié)合酶Ubc9作用下結(jié)合為RSUME-Ubc9-SUMO-1復(fù)合體，然后識別IκB上泛素結(jié)合位點，進而影響核轉(zhuǎn)錄因子κB抑制因子（inhibitorofnuclearfactorkappaB,IκB）穩(wěn)定性及活性，進一步對核轉(zhuǎn)錄因子（nuclearfactorkappaB，NF-κB）作用，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖。本研究擬通過研究

3、RSUME增強SUMO-1影響IκB/NF-κB通路在小鼠垂體腺瘤AtT-20細(xì)胞中的表達(dá)及意義，闡述RSUME、IκB/NF-κB對垂體腺瘤侵襲性發(fā)展的分子機制，為垂體腺瘤治療提供新的思考方向。
　　方法：
　　通過RSUME小干擾RNA（smallinterferingRNA，siRNA）轉(zhuǎn)染以及氯化鈷處理小鼠垂體腺瘤AtT-20細(xì)胞，行實時熒光定量PCR（q-PCR）檢測RSUME、IκB-α、NF-κB1的總mRNA

4、水平的改變，WB（蛋白質(zhì)印跡法）檢測總蛋白RSUME，核蛋白IκB-α及NF-κB1水平的改變，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡水平，并用Transwell檢測垂體腺瘤侵襲能力的改變。
　　結(jié)果：
　?。?）不同濃度氯化鈷模擬缺氧處理小鼠垂體腺瘤AtT-20細(xì)胞后，RSUMEmRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)（p＜0.05）,IκB-αmRNA及NF-κB1mRNA表達(dá)無明顯變化（p＞0.05）；RSUME、IκB-α蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)，NF

5、-κB1蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)。
　　（2）應(yīng)用RSUME小干擾siRNA轉(zhuǎn)染小鼠垂體腺瘤AtT-20細(xì)胞后，RSUMEsiRNA轉(zhuǎn)染組的mRNA水平與RSUME陰性siRNA對照組及NC組相比明顯下調(diào)（p＜0.05），IκB-αmRNA及NF-κB1mRNA的表達(dá)水平三組之間無明顯變化（p＞0.05）；RSUMEsiRNA轉(zhuǎn)染組與RSUME陰性siRNA組及NC組中RSUME、IκB-α蛋白水平相比明顯下降（p＜0.05），而NF

6、-κB1蛋白的表達(dá)水平也隨著相應(yīng)上升（p＜0.05）。
　?。?）與NC組及RSUME陰性siRNA轉(zhuǎn)染組對比，Transwell侵襲實驗中RSUMEsiRNA轉(zhuǎn)染組抑制AtT-20細(xì)胞侵襲（p＜0.05）。
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測RSUMEsiRNA轉(zhuǎn)染組、RSUME陰性siRNA轉(zhuǎn)染組、及NC組細(xì)胞凋亡發(fā)現(xiàn)有差異（p＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、氯化鈷可以誘導(dǎo)AtT-20細(xì)胞中RSUME上調(diào)，RSUM