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文檔簡介
1、本論文以何首烏、大黃以及決明子為研究對象,采用HPLC、HPLC-IT/MS、UPLC-QQQ/MS以及UPLC-Q-TOF/MS等現(xiàn)代檢測手段,對所選藥材中主要活性成分大黃素型蒽醌類化合物進行體內(nèi)外的定性定量研究,比較不同藥材中蒽醌類化合物體內(nèi)外代謝差異,結(jié)合蒽醌類化合物的研究現(xiàn)狀,以期系統(tǒng)的認識其在體內(nèi)外的表現(xiàn)形式,為明確蒽醌類化合物是否具有肝腎毒性提供物質(zhì)基礎。
(1)采用同一種供試品制備方法完成了10批生首烏、20批制
2、首烏、11批大黃以及8批決明子藥材的含量測定。該供試品制備方法的重復性在1.1~3.5%,對三藥材主要指標成分的加樣回收率在95.31~107.06%,且供試品在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。何首烏藥材中蒽醌成分含量差異明顯,結(jié)合蒽醌含量最高有0.25%左右,最低含量只有0.01%,大部分何首烏藥材蒽醌含量低于2010版《中國藥典》的規(guī)定。11批大黃藥材中蒽醌成分含量均能達到2010版《中國藥典》相關規(guī)定,各批藥材蒽醌含量相差不大,且單一蒽醌成分
3、之間也無顯著差異,均以大黃酚含量最高。8批決明子藥材中,來源印度兩批決明子中大黃酚含量過低,不符合2010版《中國藥典》中大黃酚的規(guī)定。這三種藥材所含蒽醌種類及藥材含量均有明顯區(qū)別,其中以大黃中蒽醌含量最大,決明子中蒽醌種類多,而何首烏中種類少及含量低。
?。?)解析何首烏中結(jié)合蒽醌的主要存在形式。本文根據(jù)實驗室自制的幾種結(jié)合蒽醌對照品,采用HPLC-IT/MS的方法對何首烏藥材中的結(jié)合蒽醌進行定性分析,確定何首烏藥材含有大黃素
4、-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷與大黃素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷兩種結(jié)合蒽醌。
(3)運用UPLC-QQQ/MS對蒽醌成分體內(nèi)代謝進行分析考察。給予SD大鼠相同蒽醌含量的大黃和何首烏藥材,大黃給藥劑量為10g/kg,何首烏給藥劑量為21g/kg(生藥/大鼠),何首烏提取物和大黃提取物體內(nèi)均能檢測到3個目標成分,其共有成分為大黃素及大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,比較兩成分的血藥濃度及藥代參數(shù)發(fā)現(xiàn),何首烏組中大黃素
5、及大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷吸收較大黃組中快,且達峰濃度高于大黃組,但是其在何首烏中的消除也較大黃劑量組快。說明何首烏及大黃中其他的成分會影響大黃素及大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的吸收和代謝。
(4)運用UPLC-Q-TOF/MS對蒽醌單體體外肝微粒體孵育代謝進行產(chǎn)物分析。選取大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黃素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚及大黃素甲醚等7種蒽醌單
6、體作為代謝底物,以大鼠、小鼠、比格犬及人四種不同肝微粒體進行體外孵育。Ⅰ相反應主要為氧化反應,存在-CH3→-CH2OH→-COOH逐步氧化的轉(zhuǎn)化。Ⅱ相反應除大黃素甲醚外存在相應的葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物,產(chǎn)物數(shù)目與底物結(jié)構(gòu)的羥基數(shù)目相關。個別蒽醌單體代謝存在明顯種屬差異。
?。?)為何首烏、大黃及決明子藥材安全性評價試驗,采用動態(tài)優(yōu)化法對所選的3種中藥材進行提取工藝優(yōu)化。三藥材水提提取工藝確定如下:何首烏10倍量回流提取3次,提取
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