Neu-P11通過(guò)抑制氧化應(yīng)激改善脂肪細(xì)胞胰島素抵抗.pdf

1、研究背景:褪黑素(melatonin，Mel)是腦松果腺合成和分泌的一種吲哚類神經(jīng)內(nèi)分泌活性物質(zhì)，具有調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律、改善睡眠等功能。Neu-P11則是一種新型褪黑素非選擇性受體激動(dòng)劑，我們前期的研究表明Neu-P11可調(diào)節(jié)高糖高脂高膽固醇誘導(dǎo)的肥胖大鼠糖脂代謝并改善其胰島素抵抗(insulin resistance，IR)狀態(tài)，體外細(xì)胞試驗(yàn)也證實(shí)Neu-P11能夠抑制甘油三酯聚積改善3T3-L1脂肪細(xì)胞IR。有研究報(bào)道，細(xì)胞內(nèi)活性氧(r

2、eactive oxygen species，ROS)水平過(guò)高造成的氧化應(yīng)激和線粒體功能障礙是導(dǎo)致胰島素抵抗的主要因素?；贜eu-P11、氧化應(yīng)激以及IR之間的聯(lián)系，本課題在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上提出假想：Neu-P11是否通過(guò)抑制氧化應(yīng)激而改善高糖高胰島素(high glucoseand highinsulin，HGI)誘導(dǎo)的3T3-L1脂肪細(xì)胞IR。
　　方法:(1)3T3-L1脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)及分化：經(jīng)典“雞尾酒”法(0.5 mm

3、ol/L IBMX，1μmol/L DEX，10μg/ml INS)誘導(dǎo)前脂肪細(xì)胞分化為成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞，油紅O染色鑒定脂肪細(xì)胞形態(tài)及3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化程度。(2) IR模型的制備：高糖(25mmol/L)高胰島素(1μmol/L INS)孵育脂肪細(xì)胞24 h，葡萄糖氧化酶法檢測(cè)糖消耗量驗(yàn)證胰島素抵抗細(xì)胞模型構(gòu)建是否成功。(3)熒光探針?lè)?、羅丹明123及葡萄糖氧化酶法分別檢測(cè)Neu-P11或Mel干預(yù)前后各組脂肪細(xì)胞中

4、ROS含量、線粒體膜電位(mitochondrial transmembrane potential，MMP)變化及培養(yǎng)基內(nèi)葡萄糖含量。(4)Western Blot檢測(cè)細(xì)胞c-jun氨基末端激酶(Jun N-terminal kinase，JNK)、核轉(zhuǎn)錄蛋白p65(Nuclear factor kappaB p65，NF-κBp65)、蛋白激酶B(Protein kinase B，Akt)的表達(dá)變化及Neu-P11或Mel干預(yù)對(duì)上述

5、蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:3T3-L1前脂肪細(xì)胞經(jīng)“雞尾酒”法誘導(dǎo)10 d后通過(guò)油紅O染色可見(jiàn)90％以上細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的“戒環(huán)樣”結(jié)構(gòu)：細(xì)胞呈圓形，內(nèi)含大量脂滴，且呈環(huán)形排列，即表明已分化為典型的成熟脂肪細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：高糖高胰島素聯(lián)合作用3T3-L1脂肪細(xì)胞24 h能明顯降低細(xì)胞的葡萄糖消耗量，成功誘導(dǎo)其發(fā)生胰島素抵抗。另外，實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明：與Control組相比，IR組細(xì)胞ROS含量明顯增高，MMP下降，細(xì)胞內(nèi)JNK/NF