2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、[目的]確定miR-21-5p與LCRG1的作用位點(diǎn),研究miR-21-5p通過靶向調(diào)控喉癌候選抑瘤基因LCRG1參與喉癌發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制。
  [方法]前期實(shí)驗(yàn)預(yù)測發(fā)現(xiàn) miR-21-5p與 LCRG1有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn),根據(jù)miR-21-5p與LCRG13’UTR的結(jié)合位點(diǎn)來構(gòu)建其野生型和突變體載體,使相應(yīng)的miRNA種子區(qū)與LCRG13’UTR不能夠互補(bǔ)結(jié)合,測定LCRG13’UTR熒光素酶的活性,運(yùn)用突變體實(shí)驗(yàn)確定其結(jié)合位點(diǎn)

2、;將miR-21-5p mimic和miR-21-5p inhibitor瞬轉(zhuǎn)入Hep2細(xì)胞,RT-PCR驗(yàn)證miR-21-5p的表達(dá)情況后,利用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測LCRG1蛋白在瞬轉(zhuǎn)后喉癌細(xì)胞系Hep2中的表達(dá)情況。采用MTT實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、遷移侵襲實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn),觀察miR-21-5p靶向調(diào)控LCRG1的表達(dá)對Hep2細(xì)胞生物學(xué)性狀的變化。
  [結(jié)果]1.miR-21-5p與LCRG13’UTR的第一個(gè)

3、結(jié)合位點(diǎn)的野生型能使熒光素酶的活性顯著性降低(P<0.05),突變體無顯著性降低,而第二個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的野生型和突變體均使熒光素酶的活性顯著性降低(P<0.05),表明第一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)為其結(jié)合位點(diǎn)。2.瞬轉(zhuǎn) miR-21-5p mimic后,RT-PCR檢測顯示miR-21-5p的表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.05),而瞬轉(zhuǎn)miR-21-5p inhibitor后,miR-21-5p的表達(dá)明顯下調(diào)(P<0.05),說明瞬轉(zhuǎn)成功。3.上調(diào)miR-21-

4、5p可抑制LCRG1蛋白水平的表達(dá),而下調(diào)miR-21-5p可促進(jìn)LCRG1蛋白水平的表達(dá)。Western blot實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示:瞬轉(zhuǎn)miR-21-5p mimic后,miR-21-5p mimic實(shí)驗(yàn)組較mimic NC對照組和Hep2細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,LCRG1的蛋白水平明顯降低(P<0.05);而瞬轉(zhuǎn)miR-21-5p inhibitor后,miR-21-5p inhibitor實(shí)驗(yàn)組較inhibitor NC對照組和Hep2

5、細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,LCRG1的蛋白水平明顯升高(P<0.05)。4.上調(diào)miR-21-5p抑制LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力增強(qiáng),而下調(diào)miR-21-5p促進(jìn)LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力減弱。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:瞬轉(zhuǎn) miR-21-5p mimic后,miR-21-5p mimic實(shí)驗(yàn)組較mimic NC對照組和Hep2細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,生長速度均明顯升高(P<0.05),表明上調(diào) miR-

6、21-5p抑制LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng);而瞬轉(zhuǎn)miR-21-5p inhibitor后,miR-21-5p inhibitor實(shí)驗(yàn)組較inhibitor NC對照組和Hep2細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,生長速度均明顯降低(P<0.05),表明下調(diào)miR-21-5p促進(jìn)LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的增殖能力減弱。劃痕實(shí)驗(yàn)、遷移實(shí)驗(yàn)及侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:瞬轉(zhuǎn)miR-21-5p mimic后,miR-21-5p mimic實(shí)驗(yàn)組較m

7、imic NC對照組和Hep2細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,遷移及侵襲能力均明顯升高(P<0.05),表明上調(diào)miR-21-5p抑制LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的遷移及侵襲能力增強(qiáng);而瞬轉(zhuǎn)miR-21-5p inhibitor后,miR-21-5p inhibitor實(shí)驗(yàn)組較inhibitor NC對照組和Hep2細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,遷移及侵襲能力均明顯降低(P<0.05),表明下調(diào)miR-21-5p促進(jìn)LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的遷移及侵襲能

8、力減弱。另流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:瞬轉(zhuǎn)miR-21-5p inhibitor后,miR-21-5p inhibitor實(shí)驗(yàn)組較inhibitor NC對照組和Hep2細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,G1期細(xì)胞百分比明顯升高,且細(xì)胞凋亡率明顯增高,表明下調(diào)miR-21-5p促進(jìn)LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的凋亡能力增強(qiáng),細(xì)胞周期主要阻滯于G1期。
  [結(jié)論]在Hep2細(xì)胞中miR-21-5p能抑制喉癌候選抑瘤基因LCRG1的表達(dá),并使Hep2細(xì)胞

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