重組法國梧桐花粉過敏原(rPla a2)對小鼠ORMDL3基因轉錄調控機制初步研究.pdf

1、目的:分析轉錄因子GATA3對小鼠ORMDL3基因轉錄的影響機制，探索重組法國梧桐花粉過敏原rPla a2對小鼠ORMDL3基因轉錄表達的影響及相關機制，為植物吸入性過敏原所致過敏性哮喘的防治尋找新的靶點提供思路。
　　方法:(1)染色質免疫沉淀、RNA干擾、轉錄因子過表達、雙熒光素酶活性分析等實驗，鑒定GATA3與小鼠ORMD3啟動子結合和啟動子活性的調控作用;(2)通過實時定量PCR和Western Blot實驗，觀察GATA

2、3對小鼠ORMDL3表達水平的影響;(3)利用法國梧桐花粉重組過敏原rPla a2探索對小鼠ORMDL3啟動子活性、mRNA及蛋白表達的影響，用ChIP-qPCR觀察rPla a2刺激后GATA3與小鼠ORMDL3啟動子區(qū)結合的影響。
　　結果:(1) ChIP實驗表明GATA3與小鼠ORMDL3核心啟動子-74bp至+141bp結合，但不能與小鼠ORMD3基因轉錄起始位點上游-921至-835 bp序列結合。(2) RNA干擾、

3、轉錄因子過表達、實時熒光定量PCR、Western Blot實驗證明GATA3能正向調控ORMDL3的表達。(3) rPla a2上調小鼠ORMDL3啟動子活性，突變GATA3和STAT6結合序列后該上調作用受抑制，rPla a2促進ORMDL3和GATA3表達，干擾GATA3表達可抑制rPla a2對ORMDL3的上調作用。ChIP-qPCR實驗發(fā)現(xiàn)rPla a2增強GATA3與ORMDL3啟動子區(qū)的結合。
　　結論:(1) G