環(huán)氧類二十烷酸對(duì)破骨細(xì)胞生成的抑制及防止卵巢切除所致的骨流失.pdf

1、目的：
　　1.探討外源性EETs在體外對(duì)破骨細(xì)胞生成及功能的影響和機(jī)制。
　　2.觀察對(duì)骨質(zhì)疏松模型小鼠進(jìn)行腹腔注射外源性EETs后小鼠體內(nèi)骨組織及其他的相關(guān)變化。
　　方法：
　　1.體外實(shí)驗(yàn)：分別用破骨細(xì)胞系RAW264.7和小鼠原代骨髓單核細(xì)胞加入RANKL被用來(lái)誘導(dǎo)破骨細(xì)胞生成，此外，小鼠原代骨髓單核細(xì)胞還加入mCSF。對(duì)以上兩種細(xì)胞加入14,15-EET（濃度為0.25μM，0.5μM，1μM，2μM

2、）。通過(guò)抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）染色、測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清內(nèi)的TRAP活性、骨吸收實(shí)驗(yàn)、檢測(cè)破骨細(xì)胞相關(guān)基因和蛋白的變化等方法測(cè)定EET對(duì)破骨細(xì)胞的形成及功能的影響。
　　2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：取4月大小C57/BL6雌鼠，進(jìn)行假手術(shù)及去卵巢（ovariectomy，OVX)手術(shù)，將14,15-EET(0.17 mg/kg)對(duì)OVX組小鼠體內(nèi)進(jìn)行腹腔注射，于術(shù)后六周對(duì)

3、實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組小鼠進(jìn)行外周血TRAP酶聯(lián)免疫測(cè)試，檢測(cè)相關(guān)炎性因子的血清水平，骨切片TRAP染色及用μCT掃描評(píng)估骨組織形態(tài)學(xué)。
　　結(jié)果：
　　通過(guò)體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，我們觀察到 EETs顯著抑制骨流失及破骨細(xì)胞的形成和活性，這一作用與減少NF-κB活化受體配體(RANKL)的活化、骨保護(hù)素的比率及血清中TNF-α和IL-1β的水平有關(guān)。在破骨細(xì)胞形成分子水平，EETs抑制RANKL導(dǎo)致的NF-κB的激活、及激活蛋白-1(AP

4、-1)和絲裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信號(hào)通路中細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（Extracellular Regulated Protein Kinase，ERK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal Kinase，JNK）的活化。此外，EETs還抑制了RANKL刺激后的活性氧（ROS）的產(chǎn)生。因而，EETs抑制了破骨細(xì)胞相關(guān)的基因表達(dá)：抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、組織蛋白酶 K（CK）、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9和