2型糖尿病對小鼠骨髓微環(huán)境中成骨與破骨細(xì)胞生成的影響.pdf

1、目的:
　　1.以高糖高胰島素環(huán)境模擬2型糖尿病早期的骨髓微環(huán)境的改變,研究在高糖高胰島素環(huán)境下,骨髓微環(huán)境中破骨細(xì)胞生成的改變,了解2型糖尿病對骨代謝中溶骨因素的影響。
　　2.研究基因突變型自發(fā)性2型糖尿病小鼠(KK/Upj-Ay/J小鼠)骨代謝的改變,以了解2型糖尿病對骨代謝的影響。
　　3.研究2型糖尿病患者的常用降糖藥物羅格列酮對骨髓微環(huán)境中成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞分化及功能的影響,以及對成骨細(xì)胞破骨細(xì)胞之間的紐帶

2、OPG/RANKL/RANK分子信號軸的影響。
　　方法:
　　1.取C57BL/6小鼠骨髓內(nèi)單個核細(xì)胞用細(xì)胞核因子kB受體活化因子配基(RANKL)及巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)誘導(dǎo)其向破骨細(xì)胞分化,在誘導(dǎo)開始時即分成四組:空白對照組,高濃度葡萄糖組,高濃度胰島素組及高糖高胰島素組,誘導(dǎo)結(jié)束后進(jìn)行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、檢測TRAP活性以及實時PCR檢測相關(guān)基因的表達(dá)。應(yīng)用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。<

3、br>　　2.采用KK/Upj-Ay/J小鼠作為2型糖尿病模型小鼠,C57BL/6小鼠作為對照小鼠,測定兩組小鼠的血清骨代謝指標(biāo),以Micro-CT測定小鼠脛骨骨密度,檢測兩組小鼠骨髓腔內(nèi)細(xì)胞向成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞分化的能力。
　　3.以羅格列酮干預(yù)成骨前體細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的過程,破骨前體細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的過程,干預(yù)結(jié)束后,進(jìn)行ALP與TRAP染色及活性測定,Real-timePCR及Westernblot檢測成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞

4、相關(guān)指標(biāo)以及OPG,RANKL與RANK的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.與空白對照組相比,高糖與高胰島素組TRAP陽性且多核的破骨細(xì)胞數(shù)明顯較少,TRAP活性明顯下降,且Real-timePCR顯示,高糖與高胰島素組破骨細(xì)胞的特異性基因組織蛋白酶K及TRAP的表達(dá)也明顯下降。
　　2.與正常組小鼠相比,2型糖尿病組小鼠體重較大,攝食量高,血清糖與血清胰島素水平明顯較高,且2型糖尿病小鼠脛骨BMD較低;2型糖尿病組小鼠髓腔

5、內(nèi)間充質(zhì)細(xì)胞/破骨前體細(xì)胞向成骨細(xì)胞/破骨細(xì)胞分化的能力較不同程度受損。
　　3.與對照組相比,羅格列酮會抑制成骨細(xì)胞分化,促進(jìn)破骨細(xì)胞分化,且羅格列酮作為PPARγ會使成骨細(xì)胞分泌OPG降低與分泌RANKL升高,降低成骨細(xì)胞分泌的OPG/RANKL的比率來促進(jìn)破骨細(xì)胞成生。
　　結(jié)論:
　　1.高糖高胰島素環(huán)境會促進(jìn)破骨細(xì)胞生成,因此,2型糖尿病體內(nèi)環(huán)境對骨代謝中溶骨因素有促進(jìn)作用,可能會導(dǎo)致其發(fā)生骨質(zhì)疏松。