出生后大鼠卵巢中卵子再生的研究.pdf

1、近來有研究報道說明出生后的幼年和成年小鼠卵巢表面上皮(OSE)有生殖干細胞(GSCs)和卵泡更新過程。這些報道引發(fā)了許多質(zhì)疑和爭論。本文對大鼠卵巢進行了類似研究，以檢查大鼠卵巢內(nèi)是否也具有GSCs和卵泡更新過程。主要研究內(nèi)容如下：
　　 本文選擇大鼠的vasa類似物RVLGN端的部分片段作為抗原制備抗體識別大鼠卵巢中的生殖細胞。首先克隆了RVLG基因的cDNA5’端約627 bp片段，序列測定結果表明，我們所克隆的RVLG cD

2、NA片段比GenBank中報道的大鼠RVLG cDNA(NM_001077647)相應部位多60 bp。與大鼠RVLG基因序列(NW_001084795.1)比對后確定所多出來的60 bp系第7內(nèi)含子的5’端和第8內(nèi)含子的3’端兩處選擇性剪接的結果，導致第7外顯子3’端多出45 bp，第9外顯子5’端多出15 bp。進一步克隆RVLG cDNA全長序列后發(fā)現(xiàn)第一次克隆中出現(xiàn)的60 bp只保留了第7外顯子3’端的45 bp，而沒有第9外顯

3、子5’端的15 bp。將該片段插入原核表達載體pGEX-4T1，轉入大腸桿菌BL21(DE3)中成功地誘導表達了GST-pRVLG融合蛋白，目的蛋白占菌體總蛋白的10%以上。用純化后的GST-pRVLG融合蛋白免疫昆明(KM)小鼠，最后給小鼠腹腔注射S180細胞制備了抗RVLG的腹水多克隆抗體。Westernblot鑒定RVLG腹水多克隆抗體的特異性表明制備的抗體可特異性地識別RVLG蛋白。
　　 本文研究了幼年和成年期大鼠卵巢

4、表面是否存在可以維持新生卵子發(fā)生的GSCs，以及新生卵子發(fā)生所需的一些減數(shù)分裂標記基因的表達情況。卵巢組織切片觀察表面上皮沒有找到大的卵圓形細胞，免疫組織化學檢查卵巢皮層也沒有找到RVLG陽性細胞及RVLG、BrdU雙陽性細胞。RT-PCR檢測出生后大鼠卵巢，也沒有發(fā)現(xiàn)減數(shù)分裂特異性基因Scp1、Scp3和Spo11的轉錄。Westernblot和免疫組織化學法均未能檢測到減數(shù)分裂進入標記DMC1、STRA8及SCP3。實驗未能觀察到成